一生物緩沖劑的分類：

1.    磷酸鹽緩沖液

　　磷酸鹽緩沖液是應(yīng)用廣泛的生物緩沖液。由于其二次離解作用，緩沖液pH值范圍較寬,，可配置不同pH值的酸性,、堿性和中性緩沖液:

       制備酸性緩沖液可直接使用NaH2PO4或KH2PO4, pH值范圍為1~5;

　　堿性緩沖液可直接使用Na2HPO4或K2HPO4, pH范圍為9~12;

　　中性緩沖液中含有等量的NaH2PO4和Na2HPO4或等量的KH2PO4和K2HPO4溶液，pH值為5.5~8.5,。

　    優(yōu)點(diǎn)：①易于配制成各種濃度 ,；②pH值范圍寬；③pH受溫度的影響??；

　　 缺點(diǎn)：①易與常見的鈣、鎂,、重金屬離子形成沉淀,；②抑制某些生化過程；

2. Tris緩沖液

　　Tris緩沖液在生物化學(xué)研究中有著廣泛的應(yīng)用,。它是弱堿,，通常在“中性”范圍內(nèi)使用。Tris-HCl緩沖:pH = 7.5 ~ 8.5;三磷酸緩沖液:pH = 5.0 ~ 9.0,。

　　除TRIS - hcl外,，TRIS還有多種衍生化緩沖:

　　TBS=Tris-HCl+ NaCl+KCl，常用來清洗免疫染色組織或Western blotting中的Western blotting膜;

　　TBST=Tris-HCl+NaCl+tween20,，一種常用于Western Blotting的膜緩沖液;

　　TE=Tris-HCl+EDTA,，對(duì)DNA堿基具有保護(hù)作用，常用于DNA的穩(wěn)定和儲(chǔ)存;

　　TAE=Tris堿+乙酸+EDTA,，是一種廣泛應(yīng)用于短片段DNA電泳的緩沖體系;

　　TBE=三堿基+硼酸+EDTA,，適用于長期DNA電泳，對(duì)小片段有較好的分離效果,。

　　優(yōu)點(diǎn)： ①因?yàn)門ris堿的堿性較強(qiáng),，所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液；②對(duì)生物化學(xué)過程干擾很小,，不與鈣,、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。

　　缺點(diǎn)：①緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,，緩沖液稀釋十倍,，pH值的變化大于0.1；②溫度效應(yīng)大,，溫度變化對(duì)緩沖液pH值的影響很大,，所以一定要在使用溫度下進(jìn)行配制，室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用于0℃～4℃,。 ③易吸收空氣中的CO2,，所以配制的緩沖液要蓋嚴(yán)密封,。④此緩沖液對(duì)某些pH電極發(fā)生一定的干擾作用，所以要使用與Tris溶液具有兼容性的電極,。

3. Good’s緩沖液

　　在 1960 年代中期,，N.E.Good鑒于一般的緩沖液系統(tǒng)并不適合生化實(shí)驗(yàn)所使用，必須用人為設(shè)計(jì)和人工合成的方法來找到專門用于生命科學(xué)研究的特定的緩沖體系,，這些緩沖體系們都具有以下特質(zhì)：

　　1.pKa 在6~8 之間,；2.在水溶液中有高溶解度；3.鹽效應(yīng)很??；4.不易被運(yùn)送通過細(xì)胞膜；5.不易受溫度,、離子組成,、濃度等因素影響解離度；6.不會(huì)與金屬離子形成錯(cuò)合物,，或錯(cuò)合物不沉淀,、不干擾生物活性；7.化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,。

　　Good’s緩沖液的主要優(yōu)點(diǎn)是不參加和不干擾生物化學(xué)反應(yīng)過程,，對(duì)酶化學(xué)反應(yīng)等無抑制作用，所以它們專門用于細(xì)胞器和極易變性的,、對(duì)pH敏感的蛋白質(zhì)和酶的研究工作,。

　　其缺點(diǎn)是：①價(jià)格昂貴，②對(duì)測(cè)定蛋白質(zhì)含量的雙縮脲法和Lowry法不適用,，因?yàn)樗鼈儠?huì)使空白管的顏色加深,。

二幾種生物緩沖劑的應(yīng)用:

1、Tris乙磺酸（TES）

應(yīng)用描述∶ pKa7.4（生理pH）,，是一種應(yīng)用非常廣泛的生物緩沖試劑,。TES適用于各種需要二價(jià)金屬離子的細(xì)胞培養(yǎng)體系，然而許多其他緩沖液（比如檸檬酸鹽或者磷酸鹽）會(huì)產(chǎn)生螯合或者沉淀反應(yīng),，使其不能滿足這種要求,。

Bis-Tris，中文名雙（2-羥已基）氨基（三羥甲基）甲烷,，CAS NO.6976-37-0,，—種惰性的兩性離子緩沖液，隨著溫度的變化其解離常數(shù)只發(fā)生細(xì)微的變化,。適用于血紅蛋白的分離,，凍干保存中可保護(hù)血紅蛋白的穩(wěn)定性?？捎米骷∶富钚苑治龅挠行Ь彌_液,。2-D凝膠電泳等電點(diǎn)聚焦電泳（IEF ）中用作陰極液,。

2、Tricine

應(yīng)用描述∶ 應(yīng)用ZUI廣泛的緩沖劑之一,，常用做電泳緩沖液,，以及用來重懸細(xì)胞沉淀。Tricine具有低負(fù)電荷和高離子強(qiáng)度的特性,，非常適用于電泳分離1~100 kDa的低分子量蛋白,。用來分離低分子量多肽的緩沖液組分之一，一種有效的羥自由基清除劑,。

3、PIPES,、POPSO

PIPES,，pKa接近生理pH，適用于細(xì)胞培養(yǎng)作業(yè),。植物和動(dòng)物組織研究中使用戊二醛法組織學(xué)用緩沖液,，可降低脂質(zhì)損失。POPSO：用于儲(chǔ)存DNA樣品,，在amoniallyl標(biāo)記過程可避免與首胺基團(tuán)的交叉反應(yīng),。