人心肌細胞AC16培養(yǎng)說明書

一,、細胞培養(yǎng)條件

二,、細胞收到后處理

細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)淖詈棉k法,。收到細胞回到自己的實驗室后,，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi),，嚴格無菌操作,，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時,，可將瓶裝的*培養(yǎng)液收集至離心管中,，加入6ml*培養(yǎng)基，放入37℃,、5%CO2孵箱培養(yǎng),；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存,，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松,，傳代后建議一瓶用原瓶里面的*培養(yǎng)基,，另外一瓶用自己配的*培養(yǎng)基）

三,、細胞培養(yǎng)步驟

1. 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液，補加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/font>6cm皿中）,，培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
2. 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

1,、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,，*脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。

PS：若客戶收到2ml小管細胞,，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi),，嚴格無菌操作,；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻,，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%,，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存,。若密度超過80%,，可直接進行傳代（方法同上）,。

3）細胞凍存：

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細胞一次；2,、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，輕輕吹打細胞使之脫落,，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min,；

3,、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中,；

4,、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃,。

四,、售后服務告知書

1）細胞出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些,？判定標準是什么,？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失,、瓶身破損,、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā),；

2. 細胞污染問題,，請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi)，給我們提出真實的實驗結(jié)果,，核實后重發(fā),；

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后,，絕大多數(shù)細胞未存活,，（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片），重發(fā),；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封,，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

5. 細胞活性問題,，請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發(fā),；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照,，3天未告知的，視為產(chǎn)品合格,。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關(guān)操作的詳細步驟的,，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責任的,，重發(fā),。技術(shù)人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。

二）細胞出現(xiàn)問題,，不予以重發(fā)的情況有哪些,？

1. 客戶造成細胞污染，不重發(fā),；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,，不重發(fā),；

4. 細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,，不重發(fā),；

5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā),；

6. 細胞收到2天內(nèi)，未告知,，不重發(fā),；

7. 視具體情況而定。 

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