Q1：HPLC 方法開發(fā)中首要的挑戰(zhàn)是什么？

A1：首要的挑戰(zhàn)有兩個(gè),。首先是化合物之間的分離度 問(wèn)題,，色譜分析的前提是分離，只有充分分離才能準(zhǔn) 確地定量（使用 MS 作為檢測(cè)器時(shí)對(duì)于非同分異構(gòu)體 等情況例外）,；其次是分析物色譜峰的峰形,，當(dāng)峰形 不佳的時(shí)候（可以用拖尾因子、柱效等來(lái)衡量）,，也 會(huì)影響分析物的定量和分離,。

Q2：有哪些方法可以解決分離度的問(wèn)題？

A2：1990 年研究人員對(duì)這個(gè)問(wèn)題進(jìn)行了系統(tǒng)的研究,， 認(rèn)為分離度 Rs 主要由三個(gè)因素決定,，也就是柱效 N， 選擇性 α 和保留因子 k（如下圖）,。這些年來(lái)的很多 技術(shù)革新都是通過(guò)提高 N 來(lái)提高分離度,，比如設(shè)計(jì)了 核殼硅膠作為色譜柱填料基質(zhì)或者用 UPLC 儀器搭配 小粒徑（亞 2 μ）顆粒填料。但更根本和有效的途徑是 通過(guò)改變選擇性來(lái)實(shí)現(xiàn)分離,，也就是改變難分離的化 合物與固定相和流動(dòng)相之間的作用力,，從下圖中也可 以看到，通過(guò)改變選擇性可以有效改善分離度,。

Q3：有哪些方法可以改變選擇性,？

A3：改變選擇性的方法有很多。最重要的就是從三個(gè) 角度出發(fā)：分析物本身,、流動(dòng)相以及固定相。對(duì)于可 離子化的分析物,，根據(jù)化合物的 pKa 針對(duì)性地改變流 動(dòng)相 pH 可以有效改變選擇性,；另外，由于常用的溶劑 （正相中的乙醇,、異丙醇,，反相中的甲醇、乙腈）在 氫鍵,、極性作用等的差異比較大,，因此改變流動(dòng)相時(shí) 常常也會(huì)有效改善選擇性,；還有非常重要的是可以根 據(jù)難分離的化合物之間的差異，針對(duì)性地選擇可以識(shí) 別這些差異的色譜柱,，比如 π-π 作用,、氫鍵作用、偶極 - 偶極作用,、疏水作用,、離子交換作用、形狀選擇性等,， 通過(guò)選擇合適的色譜柱往往也能達(dá)到出奇制勝的效果,。

Q4：峰形問(wèn)題有哪些原因和解決辦法？

A4：解決峰形問(wèn)題最關(guān)鍵的是找對(duì)原因,。造成峰形問(wèn) 題的原因有很多,，但是大部分是化合物本身的原因， 比如含有與固定相產(chǎn)生強(qiáng)作用的基團(tuán)（如含 N 的堿性 基團(tuán),、螯合基團(tuán)等）,，或者含有在某些流動(dòng)相條件下 會(huì)互變的基團(tuán)等。至于解決辦法,，就需要對(duì)癥下藥,， 比如對(duì)于前者就需要在流動(dòng)相中加入添加劑或者選擇 更“惰性”的柱子，對(duì)于后者就需要選擇更合適的流 動(dòng)相條件或者改變分離模式,。

Q5：星譜科技提供的色譜柱有哪些優(yōu)勢(shì),？

A5：星譜科技目前主要提供英國(guó) Horizon 色譜公司的 色譜柱，這些色譜柱的主要優(yōu)勢(shì)有三個(gè)：首先,，它的 多款色譜柱具有*的選擇性,，在解決分離度問(wèn)題方 面很有優(yōu)勢(shì)，比如 C18/AR,、C18/PFP 和 amide 18 等 復(fù)合型固定相設(shè)計(jì),，可以在保留 C18 疏水性的基礎(chǔ)上 引入比如 π-π 作用、氫鍵作用,、偶極 - 偶極作用等,； 其次，幾乎所有的這些鍵合固定相都有核殼硅膠基質(zhì) 類型填料可供選擇,，保證在好的選擇性的同時(shí)具有高 柱效,，從而獲得更好的分離度；最后,，Horizon 色譜 柱選擇的硅膠都是超純,、超惰性的硅膠，可以盡量降 低因分析物和硅膠表面的作用而造成的峰形問(wèn)題?？?結(jié)來(lái)說(shuō),，Horizon 色譜柱是解決色譜分析中分離度和 峰形問(wèn)題的利器。同時(shí),，星譜科技的技術(shù)人員對(duì)色譜柱也有深刻的理解,，因此可以根據(jù)用戶的具體項(xiàng)目需 要更精準(zhǔn)地選擇色譜柱，節(jié)約方法開發(fā)的時(shí)間,。