安捷倫二維液相色譜精準助力應對 2020 版藥典 0722 維生素 D 測定第四法

維生素 D 是人體所必須的脂溶性維生素,。維生素D的基本作用是能促進鈣和磷的吸收,，缺乏維生素 D,，會影響鈣的吸收和骨代謝,，最終引起佝僂病,、軟骨癥或骨質疏松癥等,。作為藥物的維生素 D 相關制劑是補充維生素 D 缺乏的最直接的途徑,。準確測定維生素 D 及其前體的含量,，能夠保證維生素 D 達到目標的效價,，從而保證藥物的有效性和安全性。

安捷倫二維液相色譜精準助力應對

 2020 版藥典 0722 

維生素 D 測定第四法

2020 版藥典 0722 新增維生素 D 測定第四法相關背景

維生素 D 測定的難點在于含維生素 A 醇及其他相應脂溶性雜質的供試品,，如維生素 AD 軟膠囊,、滴劑等，其基質中存在大量油性輔料（大豆油）和維生素 A 醇的干擾,，同時維生素 D2/D3 含量低（部分品種維生素 D2/D3 含量僅占 1‰ 左右) ,，加上維生素 D 易受光熱影響產(chǎn)生前維生素 D（pre-vitamin D）、反式維生素 D (Trans vitamin D),、速甾醇（tachysterol）和光甾醇（lumisterol）等,。對于本類樣品，2015 版藥典和 2020 版藥典的第二法和第三法,，通常需要將樣品進行皂化,、有機溶劑液液萃取,，結合反相色譜系統(tǒng)凈化，最后再采用正相色譜系統(tǒng)進行定量檢測,。方法測定結果的準確性和重現(xiàn)性較難控制,，也嚴重影響方法的分析效率。

 通過二維柱切換的液相色譜技術不僅可以提升系統(tǒng)分離能力,，改善結構相似化合物的分離分析,；同時可以通過第一維的初步分離去除樣品基質中大量雜質成分干擾，實現(xiàn)樣品凈化,。因此 2020 版藥典 0722 維生素 D 測定新增了第四法即在線二維液相色譜法,，方法第一維和第二維均采用正相色譜體系，其主要優(yōu)點是樣品可用正己烷溶解后直接進樣分析,，且具有載樣量大,，易去除非極性基質干擾成分，同時維生素 D 與其他羥基化的代謝物分離良好等優(yōu)點,。

安捷倫的應對方案

儀器系統(tǒng)的基本搭配如圖 1 所示,，整體上需要兩套泵、一個兩位六通切換閥,、單或雙紫外檢測器組成,。

主要色譜條件

色譜柱：

第一維：ChromCore VD-ChP4, 2.1*150mm，3μm（納譜分析,，貨號S015-030012-02115S）,；

第二維：Zorbax Silica, 3.0*100mm, 1.8μm（Agilent Technologies，貨號 828975-301）,；