伊維菌素的危害及檢測目的

阿維菌素類藥物（Avermectins,，AVMs）由鏈霉菌的發(fā)酵產物中分離的大環(huán)內酯類抗生素，包括伊維菌素,、多拉菌素,、阿維菌素、愛普菌素等品種,。阿維菌素類藥物是目前獸醫(yī)臨床上應用*泛的獸用驅蟲藥,，被廣泛應用于牛、羊等動物,，其作用機理是干擾害蟲神經生理活動,，致使害蟲出現麻痹而中毒死亡。阿維菌素類藥物雖然作用劑量小,，但其脂溶性較高,，殘留時間長，世界衛(wèi)生組織將其列為高毒化合物,。該類藥物的不規(guī)范使用和食物鏈富集,，易引發(fā)運動失調、呼吸緩慢,、中樞神經系統中毒等癥狀,，甚至致人死亡，對人類健康造成嚴重威脅,，所以應對動物性食品中阿維菌素類藥物含量進行監(jiān)測,。我國農業(yè)農村部和國家市場監(jiān)督管理總局2019年發(fā)布的GB 31650-2019《食品安全國家標準食品中獸藥最 大殘留*》中明確規(guī)定了伊維菌素、多拉菌素,、阿維菌素,、乙酰氨基阿維菌素在動物靶組織中的殘留*。

本文闡述了如何將伊維菌素從樣品基質中分離提取出來,，并經過凈化后,，轉化成液相色譜-串聯質譜儀可以檢測的形式。以提取、凈化為重點,，依據國標GB/T 22953-2008,，為檢測人員和相關領域研究人員提供一定的參考。

檢測項目：伊維菌素,、阿維菌素,、多拉菌素、乙酰氨基阿維菌素

應用范圍：河豚魚肌肉,、鰻魚肌肉,、烤鰻

高效液相色譜法

方法原理：河豚魚、鰻魚和烤鰻中殘留的伊維菌素,、阿維菌素,、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素殘留用乙腈提取后，正己烷脫脂,，中性氧化鋁柱凈化,。樣品溶液供液相色譜-串聯質譜儀檢測，外標峰面積法定量,。

前處理儀器：

分析天平（感量0.1 mg和0.01 g）；組織搗碎機,；勻漿機（8000 r/min）,；離心機（4000 r/min）；超聲波水??；液體混勻器；固相萃取裝置,；氮吹儀,。 

檢測儀器： HPLC-MS/MS+ESI源

試樣的制備與保存

取樣品約500 g用組織搗碎機搗碎，裝入潔凈容器作為試樣,，密封,，并標明標記，于零下18 ℃冰箱中保存,。制樣操作過程中應防止樣品受到污染或殘留物含量發(fā)生變化,。

前處理方法

1.提取

準確稱取2 g組織樣品（準確至0.01 g）至50 mL離心管中，加入8 mL乙腈,，勻漿機上8000 r/min均質20 s,，4000 r/min離心5 min，上清液轉移至50 mL離心管中,；另取一50 mL離心管加入8 mL乙腈,，洗滌勻漿刀頭10 s，洗滌液移入前一離心管中，用玻棒搗碎離心管中的沉淀,，液體混勻器上振蕩30 s,，4000 r/min離心5 min，上清液合并至50 mL離心管,，離心管中的沉淀再加入6 mL乙腈,，用玻棒搗碎離心管中的沉淀，液體混勻器上振蕩30 s,，4000 r/min離心5 min,，上清液合并至50 mL離心管中，乙腈定容至25.0 mL刻度,，混勻備用,。

2.凈化

向上述裝有樣品提取液的50 mL離心管中加入10 mL乙腈飽和的正己烷脫脂，渦旋振蕩1 min,，4000 r/min離心5 min,，棄去上層正己烷，重復此操作一次,，下層乙腈溶液待用,。

將中性氧化鋁凈化柱安置在固相萃取裝置上，準確移取10.0 mL已脫脂的樣品提取液至中性氧化鋁凈化柱中,，控制流速在1 mL /min～2 mL /min,，用2 mL×2乙腈淋洗凈化柱，收集全部流出液,，流出液轉移至吹氮管中,，50 ℃下氮氣吹至干，用1.00 mL乙腈溶解殘渣,，并置超聲波水浴中超聲振蕩10 min,，0.2 μm濾膜過濾，供液相色譜-串聯質譜測定,。

國標解讀及注意事項

1.標準物質用乙腈配成100 μg/mL的標準儲備液,，在零下18 ℃保存。

2.本方法通過乙腈提取,，正己烷脫脂,，中性氧化鋁柱凈化的方式進行目標化合物的提取凈化。

3.本方法采用洗滌均質刀頭,，三次提取的方式,，提高目標化合物的回收率。

4.氧化鋁柱凈化過程中除了活化溶液,，其余溶液（上樣液和淋洗液）都要收集,。為保證凈化效果,，過柱時需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下,?？捎蒙唐坊闹行匝趸X固相萃取柱替代方法中手工填充的中性氧化鋁凈化柱。

5.由于該類化合物沒有對應的同位素內標用于回收率的校正,，所以本方法使用空白樣品提取液配制基質標準工作液,，進行定量。

參考文獻

GB/T 22953-2008 河豚魚,、鰻魚和烤鰻中伊維菌素,、阿維菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法

河豚魚,、鰻魚中伊維菌素殘留量測定的前處理流程圖：