如何正確保存抗體產(chǎn)品?為什么有的產(chǎn)品要保存在-20°,,有的卻要放在4°冰箱,?不同類型抗體儲存時候是否有差異,?本篇將重點為大家解答,請保存好這份abcam抗體保存指南,,以便于以后查詢,。
一、保存溫度
對于我們的許多抗體而言,,分裝為小等份(推薦每份體積為 10 μL)在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下凍存是最佳的保存條件,。分裝抗體可以最大限度減少凍融對抗體造成的損壞,還可避免多次從同一管中移取抗體而引入污染,。分裝后抗體只可凍融一次,,如有剩余,應(yīng)保存在 4 ℃ 下,。
收到抗體后,,請以 10,000 × g 離心 20 秒,沉降滯留在管蓋螺紋中的溶液,,然后分裝抗體并將其轉(zhuǎn)移至低蛋白質(zhì)結(jié)合的微量離心管中,。分裝抗體的量取決于您在實驗中常用的量。分裝抗體應(yīng)不少于 10 μL,;分裝抗體量越少,,濃度就越容易受到蒸發(fā)以及儲存樣品管表面吸附的影響。
在大部分情況下,,可在收到抗體之后立即將其保存于 4 ℃ 下,,可保存 1 至 2 周。具體產(chǎn)品還請遵循數(shù)據(jù)表上的保存建議,這一點非常重要
二,、特例
切勿凍存酶偶聯(lián)的抗體,,而應(yīng)將其保存在 4 ℃ 下。凍融不僅會影響抗體的結(jié)合能力,,還會降低酶活性,。
偶聯(lián)抗體(無論是偶聯(lián)有熒光染料、酶還是生物素)應(yīng)保存在深色樣品瓶中或用錫箔紙包裹樣品瓶,。暴露于光下會影響偶聯(lián)物的活性,。熒光偶聯(lián)物尤其容易發(fā)生光致漂白,因此在實驗各階段都應(yīng)避光保存,。
三,、污染- 為了防止微生物污染,可將疊氮化na加入抗體制備物中,,疊氮化na的最終濃度為 0.02% (w/v)。我們的多款抗體中都含有這種保護(hù)劑,,其濃度范圍為 0.02%-0.05%,。每個抗體產(chǎn)品數(shù)據(jù)表的保存緩沖液部分將對此進(jìn)行說明。
IgG3 同型抗體的*之處在于其解凍后容易形成聚集體,,因此應(yīng)始終保存在 4 ℃ 下,。
腹水液中可能含有蛋白酶,因此收到后應(yīng)盡快凍存,。
四,、不使用疊氮化na的情況
如果要用抗體對活細(xì)胞進(jìn)行染色或處理,或者要用抗體進(jìn)行體內(nèi)研究,,請務(wù)必使用不含疊氮化na的制備物,。這種抗菌劑對大部分生物體都有毒害作用:它會阻斷細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng)。
疊氮化na會干擾涉及胺基的所有偶聯(lián)反應(yīng),,因此必須在進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)之前將其去除,。完成偶聯(lián)反應(yīng)之后,可使用疊氮化na保存抗體,。另一種可用的抗菌劑是 0.01% 硫柳汞na(硫柳汞),,這種物質(zhì)不含伯胺。
抗體溶液中的疊氮化na可通過滲析或凝膠過濾去除,。IgG 的分子量為 150,000 Da(IgM 約為 600,000 Da),,疊氮化na的分子量為 65 Da。截留分子量為 14,000 Da 的微滲析裝置可使疊氮化物順利擴散出去,,而抗體得以保留,。
滲析過程在燒杯中(置于磁力攪拌器上,溫度保持 4 ℃)進(jìn)行,每毫升抗體使用至少 1 升預(yù)冷的 PBS,,攪拌滲析裝置 6 小時,。更換 PBS 兩次,每次更換后均攪拌至少 6 小時,。如有可能,,所有材料都應(yīng)滅菌,并且應(yīng)在無菌條件下處理所得制備物,。
五,、凍融損壞
反復(fù)凍融可能使抗體變性,導(dǎo)致抗體形成聚集體,,從而降低其結(jié)合能力,。所以抗體產(chǎn)品務(wù)必要避免反復(fù)凍融。
對大部分抗體而言,,在 -20 ℃ 下保存就已足夠,;在 -80 ℃ 下保存并無明顯優(yōu)勢。應(yīng)避免使用無霜冰箱,,因為此類冰箱的凍融循環(huán)(用于減少霜的形成)正是保存此類抗體需要避免的,。出于相同的原因,應(yīng)將抗體樣品瓶放在冰箱中溫度波動最小的區(qū)域,,例如抵靠冰箱背板放置而不是置于冰箱門架上,。
有些研究人員向抗體中加入冷凍保護(hù)劑甘油(最終濃度為 50%)以防止凍融損壞;甘油可將冷凝點降至 -20 ℃ 以下,。雖然這種方法可用于多種抗體,,但我們僅對少數(shù)幾種 Abcam 抗體在這種保存條件下的穩(wěn)定性進(jìn)行了測試,我們僅擔(dān)保遵循數(shù)據(jù)表建議進(jìn)行保存的抗體的性能,。我們不建議在 -80 ℃ 下保存含甘油的溶液,,因為該溫度低于甘油的冷凝點。請注意,,甘油可能會被細(xì)菌污染,。如果加入了甘油或任何冷凍保護(hù)劑,應(yīng)當(dāng)小心操作,,確保獲得無菌制備物,。
六、蛋白質(zhì)和穩(wěn)定劑
- 將抗體稀釋至工作濃度后,,在 4 ℃ 下保存不得超過一天,。一般而言,以高濃度保存的蛋白質(zhì)更不易降解,,理想濃度是 1 mg/mL 或更高,。這就是將蛋白質(zhì)(如 BSA)作為穩(wěn)定劑加入抗體溶液的基本原理,。加入的蛋白質(zhì)還能盡可能減少抗體結(jié)合到容器壁上造成的損失。請勿向?qū)⒁M(jìn)行偶聯(lián)的抗體中加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑,,因為蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑會與抗體競爭,,降低偶聯(lián)效率。
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