凱氏定氮儀,，又稱為又名定氮儀、蛋白質(zhì)測定儀,、粗蛋白測定儀,，是根據(jù)蛋白質(zhì)中氮的含量恒定的原理,，通過測定樣品中氮的含量從而計算蛋白質(zhì)含量的儀器,。凱氏定氮儀儀是常用的分析儀器，被廣泛用于谷物,、食品,、飼料、水,、土壤,、淤泥、沉淀物和化學品中的氨,、蛋白質(zhì)氮含量,、酚、揮發(fā)性脂肪酸,、二氧化硫,、乙醇等含量。用戶在使用凱氏定氮儀時,，需要對于它使用步驟及日常維護保養(yǎng)有一定的了解,。下面賢集網(wǎng)小編，給您介紹一下凱氏定氮儀的使用和維護,。

1,、凱氏定氮儀使用步驟
（1）消化
準備6個凱氏燒瓶，標號,。1,、2、3號燒瓶中分別加入適當濃度的蛋白溶液1.0mL,，樣品要加到燒瓶底部,，切勿沾在瓶口及瓶頸上。再依次加入硫酸鉀-硫酸銅接觸劑0.3g,，濃硫酸2.0mL,，30%過氧化氫1.0mL。4,、5,、6號燒瓶作為空白對照，用以測定試劑中可能含有的微量含氮物質(zhì),，對樣品測定進行校正,。4、5,、6號燒瓶中加入蒸餾水1.0mL代替樣液,，其余所加試劑與1、2,、3號燒瓶相同,。2,、將加好試劑的各燒瓶放置消化架上，接好抽氣裝置,。先用微火加熱煮沸,，此時燒瓶內(nèi)物質(zhì)炭化變黑，并產(chǎn)生大量泡沫,，務必注意防止氣泡沖出管口,。待泡沫消失停止產(chǎn)生后，加大火力,，保持瓶內(nèi)液體微沸,，至溶液澄清后，再繼續(xù)加熱使消化液微沸15min,。在消化過程中要隨時轉(zhuǎn)動燒瓶,，以使內(nèi)壁粘著物質(zhì)均能流入底部，以保證樣品*消化,。消化時放出的氣體內(nèi)含SO2，具有強烈刺激性,，因此自始自終應打開抽水泵將氣體抽入自來水排出,。整個消化過程均應在通風櫥中進行。消化*后,，關閉火焰,，使燒瓶冷卻至室溫。

（2）蒸餾和吸收

蒸餾和吸收是在微量凱氏定氮儀內(nèi)進行的,。凱氏定氮蒸餾裝置種類甚多,，大體上都由蒸氣發(fā)生、氨的蒸餾和氨的吸收三部分組成,。

1）儀器的洗滌
儀器安裝前,，各部件需經(jīng)一般方法洗滌干凈，所用橡皮管,、塞須浸在10%NaOH溶液中,，煮約10min，水洗,、水煮10min,，再水洗數(shù)次，然后安裝并固定在一只鐵架臺上,。

儀器使用前,，微量全部管道都須經(jīng)水蒸氣洗滌，以除去管道內(nèi)可能殘留的氨,，正在使用的儀器,，每次測樣前,，蒸氣洗滌5min即可。較長時間未使用的儀器,，重復蒸氣洗滌,，不得少于三次，并檢查儀器是否正常,。仔細檢查各個連接處,，保證不漏氣。

首先在蒸氣發(fā)生器中加約2/3體積蒸餾水,，加入數(shù)滴硫酸使其保持酸性,，以避免水中的氨被蒸出而影響結(jié)果，并放入少許沸石(或毛細管等),，以防爆沸,。沿小玻杯壁加入蒸餾水約20mL讓水經(jīng)插管流入反應室，但玻杯內(nèi)的水不要放光,，塞上棒狀玻塞,，保持水封，防止漏氣,。蒸氣發(fā)生后,，立即關閉廢液排放管上的開關，使蒸氣只能進入反應室,，導致反應室內(nèi)的水迅速沸騰,，蒸出蒸氣由反應室上端口通過定氮球進入冷凝管冷卻，在冷凝管下端放置一個錐形瓶接收冷凝水,。從定氮球發(fā)燙開始計時,，連續(xù)蒸煮5min，然后移開煤氣燈,。沖洗完畢,，夾緊蒸氣發(fā)生器與收集器之間的連接橡膠管，由于氣體冷卻壓力降低,，反應室內(nèi)廢液自動抽到反應室外殼中,，打開廢液排出口夾子放出廢液。如此清洗2~3次,，再在冷凝管下?lián)Q放一個盛有硼酸-指示劑混合液的錐形瓶使冷凝管下口*浸沒在溶液中,，蒸餾1~2min，觀察錐形瓶內(nèi)的溶液是否變色,。如不變色,，表示蒸餾裝置內(nèi)部已洗干凈。移去錐形瓶,，再蒸餾1~2min,，用蒸餾水沖洗冷凝器下口,，關閉煤氣燈，儀器即可供測樣品使用,。

2）無機氮標準樣品的蒸餾吸收
由于定氮操作繁瑣,，為了熟悉蒸餾和滴定的操作技術(shù)，初學者宜先用無機氮標準樣品進行反復練習,，再進行有機氮未知樣品的測定,。常用巳知濃度的標準硫酸銨測試三次。 取潔凈的100mL錐形瓶五只,，依次加入2%硼酸溶液20mL,，次甲基藍-甲基紅混合指示劑(呈紫紅色)3~4滴，蓋好瓶口待用,。取其中一只錐形瓶承接在冷凝管下端,，并使冷凝管的出口浸沒在溶液中。注意:在此操作之前必須先打開收集器活塞,，以免錐形瓶內(nèi)液體倒吸,。準確吸取2mL硫酸銨標準液加到玻杯中，小心提起棒狀玻塞使硫酸銨溶液慢慢流入蒸餾瓶中,，用少量蒸餾水沖洗小玻杯3次,，一并放人蒸餾瓶中。然后用量筒向小玻杯中加入10 mL 30%NaOH溶液,，使堿液慢慢流入蒸餾瓶中，在堿液尚未*流入時,，將棒狀玻塞蓋緊,。向小玻杯中加約5mL蒸餾水，再慢慢打開玻塞,，使一半水流入蒸餾瓶,，一半留在小玻杯中作水封。關閉收集器活塞,，加熱蒸氣發(fā)生器,，進行蒸餾。錐形瓶中的硼酸-指示劑混合液由于吸收了氨,，由紫紅色變成綠色,。自變色時起，再蒸餾3~5min,，移動錐形瓶使瓶內(nèi)液面離開冷凝管下口約lcm,，并用少量蒸餾水沖洗冷凝管下口，再繼續(xù)蒸餾1min,，移開錐形瓶,，蓋好,，準備滴定。 在一次蒸餾完畢后,，移去煤氣燈,，夾緊蒸氣發(fā)生器與收集器間的橡膠管，排除反應完畢的廢液,，用水沖洗小玻杯幾次,，并將廢液排除。如此反復沖洗干凈后,，即可進行下一個樣品的蒸餾,。按以上方法用標準硫酸銨再做兩次。另取2mL蒸餾水代替標準硫酸銨進行空白測定二次,。將各次蒸餾的錐形瓶一起滴定,。

3)未知樣品及空白的蒸餾吸收
將消化好的蛋白樣品三支，空白對照液三支,，依次作蒸餾吸收,。 加5mL熱的蒸餾水至消化好的樣品或空白對照液中，通過小玻杯加到反應室中,，再用熱蒸餾水洗滌小玻杯3次,，每次用水量約3mL，洗滌液一并倒入反應室內(nèi),。其余操作按標準硫酸銨的蒸餾進行,。 由于消化液內(nèi)硫酸鉀濃度高而呈粘稠狀，不易從凱氏燒瓶內(nèi)倒出,，必須加入熱蒸餾水5 mL稀釋之,，如果有結(jié)晶析出，必須微熱溶解,，趁熱加入玻杯,，使其流入反應室。此外,，還應當注意趁儀器洗滌尚未*冷卻時立即加入樣品或空白對照液,，否則消化液通過冷卻的管道容易析出結(jié)晶，造成堵塞,。

2,、凱氏定氮儀的維護保養(yǎng)

1）儀器應避免安裝在陽光直射及過冷、過熱或潮濕的地方,，室內(nèi)溫度不得超過10℃～30℃,，通風要好，應有良好的散熱條件。

2）儀器前部槽皿中若積有液體,，應經(jīng)常擦凈,。

3）長期使用后，在加熱器上會結(jié)有水垢,，它將影響加熱效率,。若水垢過厚，在關機狀態(tài)下斷電,，可將蒸汽發(fā)生器頂上的一個旋塞擰下,，在管口處插入一個小漏斗，注入除垢劑或冰醋酸清洗水垢(也可用稀釋后的硫酸),。清洗后,，打開機箱內(nèi)蒸汽發(fā)生器排水節(jié)門將水排凈，并加入清水多次清洗,。

4）加堿液桶,、加硼酸桶應定期清理沉淀物并洗凈。