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液相色譜柱使用中不可不知的8個注意事項,!

來源:上海四昌實驗儀器有限公司   2021年03月18日 18:44  

液相色譜柱是液相色譜分離能力的核心部分,,學(xué)會正確使用液相色譜柱,了解液相色譜的一些使用注意事項可以避免一些不必要的麻煩,,進而提高實驗人員的工作效率,,今天小編就為大家總結(jié)了8項液相色譜柱的注意事項。

1,、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動

溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況,;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料,因此,,在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進行,在閥進樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩,。

2,、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成

特別是反相色譜中,不應(yīng)直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?,反之亦然?/p>

3,、一般說來色譜柱不能反沖

只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì),。否則反沖會迅速降低柱效,。

4,、選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),以避免固定相被破壞,。

有時可以在進樣器前面連接一預(yù)柱,,分析柱是鍵合硅膠時,預(yù)柱為硅膠,,可使流動相在進入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,,避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

5,、經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱,,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。

在進行清洗時,,對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡,,每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右。

下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序,,作為參考:
  • 硅膠柱以正已烷(或庚烷),、二氯甲烷和甲醇依次沖洗,然后再以相反順序依次沖洗,,所有溶劑都必須嚴(yán)格脫水,。

  • 甲醇能洗去殘留的強極性雜質(zhì),已烷使硅膠表面重新活化,。反相柱以水,、甲醇、乙腈,、一氯甲烷依次沖洗,,再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動相不含緩沖液,,那么可以省略后用水沖洗這一步,。

  • 與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞砜數(shù)次,。此外,,用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染,。

  • 陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗,,陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗,除去交換性能強的鹽,,然后用水,、甲醇、二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有機物),、甲醇,、水依次沖洗,。 6、保存色譜柱

  • 應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,,柱接頭要擰緊,,防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間,。

7,、色譜柱使用過程中壓力升高的原因

如果壓力升高,一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞,,這時應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M行清洗,;另一種可能是大分子進入柱內(nèi),使柱頭被污染,;

如果柱效降低或色譜峰變形,,則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,死體積增大,。
在后兩種情況發(fā)生時,,小心擰開柱接頭,用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度(注意把被污染填料取凈)再把柱內(nèi)填料整平,。然后用適當(dāng)溶劑濕潤的固定相(與柱內(nèi)相同)填滿色譜柱,,壓平,再擰緊柱接頭,。這樣處理后柱效能得到改善,,但是很難恢復(fù)到新柱的水平。
 
柱子失效通常是柱端部分,,在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5~30mm),,可以起到保護、延長柱壽命的作用,。采用保護柱會損失一定的柱效,,這是值得的。通常色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上,。以硅膠為基質(zhì)的填料,,只能在pH=2~9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時間后,,可能有一些吸附作用強的物質(zhì)保留于柱頂,,特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙稀?/section>

8、新的色譜柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷,,使柱效下降,,這時也可補加填料使柱效恢復(fù),。

每次工作完后,,用洗脫能力強的洗脫液沖洗,,例如,ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡,。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動相時,,使用完后應(yīng)用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素(氟,、氯,、溴)的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道,不宜長期與之接觸,。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用,,應(yīng)每隔4~5天開機沖洗15分鐘。

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