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液相色譜柱使用中不可不知的8個(gè)注意事項(xiàng),!

來(lái)源:上海四昌實(shí)驗(yàn)儀器有限公司   2021年03月18日 18:44  

液相色譜柱是液相色譜分離能力的核心部分,學(xué)會(huì)正確使用液相色譜柱,,了解液相色譜的一些使用注意事項(xiàng)可以避免一些不必要的麻煩,,進(jìn)而提高實(shí)驗(yàn)人員的工作效率,今天小編就為大家總結(jié)了8項(xiàng)液相色譜柱的注意事項(xiàng),。

1,、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)

溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料,,因此,,在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩,。

2,、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成

特別是反相色譜中,不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?,反之亦然?/p>

3,、一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖

只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí),才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì),。否則反沖會(huì)迅速降低柱效,。

4、選擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是pH),,以避免固定相被破壞,。

有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱,分析柱是鍵合硅膠時(shí),,預(yù)柱為硅膠,,可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解,。

5,、經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì),。

在進(jìn)行清洗時(shí),,對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡,,每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右。

下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序,,作為參考:
  • 硅膠柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇依次沖洗,,然后再以相反順序依次沖洗,,所有溶劑都必須嚴(yán)格脫水。

  • 甲醇能洗去殘留的強(qiáng)極性雜質(zhì),,已烷使硅膠表面重新活化,。反相柱以水、甲醇,、乙腈,、一氯甲烷依次沖洗,再以相反順序依次沖洗,。如果下一步分析用的流動(dòng)相不含緩沖液,,那么可以省略后用水沖洗這一步。

  • 與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類(lèi)脂,。有時(shí)也注射二甲亞砜數(shù)次,。此外,用乙腈,、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染,。

  • 陽(yáng)離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗,陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗,,除去交換性能強(qiáng)的鹽,,然后用水、甲醇,、二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有機(jī)物),、甲醇、水依次沖洗,。 6,、保存色譜柱

  • 應(yīng)將柱內(nèi)充滿(mǎn)乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,,防止溶劑揮發(fā)干燥,。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間。

7,、色譜柱使用過(guò)程中壓力升高的原因

如果壓力升高,,一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞,這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗,;另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi),,使柱頭被污染,;

如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,,死體積增大,。
在后兩種情況發(fā)生時(shí),小心擰開(kāi)柱接頭,,用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度(注意把被污染填料取凈)再把柱內(nèi)填料整平,。然后用適當(dāng)溶劑濕潤(rùn)的固定相(與柱內(nèi)相同)填滿(mǎn)色譜柱,壓平,,再擰緊柱接頭,。這樣處理后柱效能得到改善,但是很難恢復(fù)到新柱的水平,。
 
柱子失效通常是柱端部分,,在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5~30mm),可以起到保護(hù),、延長(zhǎng)柱壽命的作用,。采用保護(hù)柱會(huì)損失一定的柱效,這是值得的,。通常色譜柱壽命在正確使用時(shí)可達(dá)2年以上,。以硅膠為基質(zhì)的填料,只能在pH=2~9范圍內(nèi)使用,。柱子使用一段時(shí)間后,,可能有一些吸附作用強(qiáng)的物質(zhì)保留于柱頂,特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙稀?/section>

8,、新的色譜柱在使用一段時(shí)間后柱頂填料可能塌陷,,使柱效下降,這時(shí)也可補(bǔ)加填料使柱效恢復(fù),。

每次工作完后,,用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗,例如,,ODS柱宜用甲醇沖洗至基線(xiàn)平衡,。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí),使用完后應(yīng)用無(wú)鹽流動(dòng)相沖洗,。含鹵族元素(氟,、氯、溴)的化合物可能會(huì)腐蝕不銹鋼管道,,不宜長(zhǎng)期與之接觸,。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用,應(yīng)每隔4~5天開(kāi)機(jī)沖洗15分鐘。

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