液相色譜柱使用中不可不知的8個(gè)注意事項(xiàng),！

來(lái)源：上海四昌實(shí)驗(yàn)儀器有限公司 2021年03月18日 18:44

液相色譜柱是液相色譜分離能力的核心部分，學(xué)會(huì)正確使用液相色譜柱,，了解液相色譜的一些使用注意事項(xiàng)可以避免一些不必要的麻煩,，進(jìn)而提高實(shí)驗(yàn)人員的工作效率，今天小編就為大家總結(jié)了8項(xiàng)液相色譜柱的注意事項(xiàng),。

1,、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)

溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料,，因此,，在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩,。

2,、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成

特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/p>

3,、一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖

只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì),。否則反沖會(huì)迅速降低柱效,。

4、選擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是pH),，以避免固定相被破壞,。

有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí),，預(yù)柱為硅膠,，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解,。

5,、經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì),。

在進(jìn)行清洗時(shí),，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡,，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右。

下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序,，作為參考：

硅膠柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇依次沖洗,，然后再以相反順序依次沖洗,，所有溶劑都必須嚴(yán)格脫水。
甲醇能洗去殘留的強(qiáng)極性雜質(zhì),，已烷使硅膠表面重新活化,。反相柱以水、甲醇,、乙腈,、一氯甲烷依次沖洗，再以相反順序依次沖洗,。如果下一步分析用的流動(dòng)相不含緩沖液,，那么可以省略后用水沖洗這一步。
與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類(lèi)脂,。有時(shí)也注射二甲亞砜數(shù)次,。此外，用乙腈,、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染,。
陽(yáng)離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗,，除去交換性能強(qiáng)的鹽,，然后用水、甲醇,、二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有機(jī)物),、甲醇、水依次沖洗,。 6,、保存色譜柱
應(yīng)將柱內(nèi)充滿(mǎn)乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊,，防止溶劑揮發(fā)干燥,。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間。

7,、色譜柱使用過(guò)程中壓力升高的原因

如果壓力升高,，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗,；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi),，使柱頭被污染,；

如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,，死體積增大,。

在后兩種情況發(fā)生時(shí)，小心擰開(kāi)柱接頭,，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1～2mm高度(注意把被污染填料取凈)再把柱內(nèi)填料整平,。然后用適當(dāng)溶劑濕潤(rùn)的固定相(與柱內(nèi)相同)填滿(mǎn)色譜柱，壓平,，再擰緊柱接頭,。這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復(fù)到新柱的水平,。

柱子失效通常是柱端部分,，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5～30mm)，可以起到保護(hù),、延長(zhǎng)柱壽命的作用,。采用保護(hù)柱會(huì)損失一定的柱效，這是值得的,。通常色譜柱壽命在正確使用時(shí)可達(dá)2年以上,。以硅膠為基質(zhì)的填料，只能在pH=2～9范圍內(nèi)使用,。柱子使用一段時(shí)間后,，可能有一些吸附作用強(qiáng)的物質(zhì)保留于柱頂，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙稀?/section>

8,、新的色譜柱在使用一段時(shí)間后柱頂填料可能塌陷,，使柱效下降，這時(shí)也可補(bǔ)加填料使柱效恢復(fù),。

每次工作完后,，用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗，例如,，ODS柱宜用甲醇沖洗至基線(xiàn)平衡,。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應(yīng)用無(wú)鹽流動(dòng)相沖洗,。含鹵族元素(氟,、氯、溴)的化合物可能會(huì)腐蝕不銹鋼管道,，不宜長(zhǎng)期與之接觸,。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應(yīng)每隔4～5天開(kāi)機(jī)沖洗15分鐘。

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