應(yīng)用簡(jiǎn)介
本實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)了《食品中丙烯酰胺的測(cè)定》GB 5009.204-2014中首一法——穩(wěn)定性同位素稀釋的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法(LC-MS/MS),,樣品經(jīng)超純水提取,,先后經(jīng)Cleanert® PEP和Cleanert® SAS固相萃取柱凈化,Venusil® MP C18色譜柱(2.1 × 150 mm,,5 μm,100 Å)分離,,0.1%的甲酸水溶液作為流動(dòng)相洗脫,,三重四級(jí)桿質(zhì)譜檢測(cè),內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量,。結(jié)果表明:當(dāng)丙烯酰胺的加標(biāo)量為2 mg/kg時(shí),,回收率在100% ~ 115%,可以滿足檢測(cè)要求,。
丙烯酰胺(acylamide,;CAS登記號(hào)79-06-1)是一種無色、無臭透明片狀晶體,;可溶于水,、醇、丙酮,、醚和三氯甲烷,,微溶于甲苯,不溶于苯和庚烷,。相對(duì)分子質(zhì)量為71.08,,結(jié)構(gòu)式如圖1所示。丙烯酰胺是一種*的神經(jīng)毒素和準(zhǔn)致癌物,,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)都證明丙烯酰胺還可導(dǎo)致遺傳物質(zhì)發(fā)生改變,,早在2005年癌癥研究機(jī)構(gòu)就已將其列為2*致癌物質(zhì)。2002年4月,,瑞典國家食品管理局發(fā)現(xiàn)許多含淀粉的食物經(jīng)過煎,、烤、炸等高溫烹調(diào)后會(huì)產(chǎn)生高含量的丙烯酰胺,。眾多研究表明薯?xiàng)l,、薯片等土豆制品中丙烯酰胺的含量非常高,超過飲用水中允許大限度的500多倍,。
因此通過有效的實(shí)驗(yàn)技術(shù)手段,,對(duì)食品中的丙烯酰胺進(jìn)行監(jiān)控,,以確保消費(fèi)者對(duì)食品消費(fèi)的安全具有重要意義。
本實(shí)驗(yàn)通過優(yōu)化前處理方法建立了丙烯酰胺在食品中的LC-MS/MS方法,。
實(shí)驗(yàn)部分
儀器,、試劑與材料
主要儀器設(shè)備
AB SCIEX API 4000+液相質(zhì)譜聯(lián)用儀;
試劑材料
某品牌原味薯片,、油條,;甲酸、甲醇,、正己烷皆為色譜純,;屈臣氏水;丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品(純度 > 99%),,用水溶,;
D3-丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(CD2=CDCONH2)(濃度500 mg/L,溶劑乙腈);80%甲醇水溶液:取20 mL水,,加甲醇稀釋定容至100 mL,;
0.1%甲酸溶液:移取100 μL甲酸并加入100 mL水,搖勻,;一次性無菌注射器,;尼龍針式過濾器(0.22 μm,直徑13 mm),;
Cleanert® PEP固相萃取柱:200 mg/6 mL,;Cleanert® SAS固相萃取柱:200 mg/3 mL。
樣品制備
樣品提取
準(zhǔn)確稱取粉碎后的1 g樣品置于50 mL離心管中,,加入200 μL D3-丙烯酰胺內(nèi)標(biāo)(1 mg/L),,再加入10 mL水,超聲振蕩30 min后,,于8000 r/min離心5 min,,將上清液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中,加入5 mL正己烷,,漩渦萃取1 min,,以6000 r/min的速度離心5 min,除去上層有機(jī)相,,再用5 mL正己烷重復(fù)萃取一次,,之后迅速取5 mL水相作為上樣液。
樣品凈化
Cleanert® PEP固相萃取柱(200 mg/6 mL)使用前依次用3 mL甲醇,、3 mL水活化,,將上述上樣液上Cleanert® PEP固相萃取柱,收集上樣液,并用4 mL 80%的甲醇水溶液洗脫,,合并收集全部洗脫液,,該洗脫液待用Cleanert®SAS固相萃取柱凈化;Cleanert®SAS固相萃取柱(200 mg/3 mL)依次用3 mL甲醇,、3 mL水活化,將上述洗脫液全部上樣,,在重力作用下流出,,收集全部流出液,并用2 mL甲醇洗脫,,合并收集全部洗脫液,。于40℃下氮吹濃縮至近干,用水定容至1 mL,,待LC-MS/MS檢測(cè),。
注:上述操作步驟可在Qdaura®卓睿全自動(dòng)固相萃取儀上完成。
色譜條件
液相條件
色譜柱:Venusil® MP C18,,5 μm,,100 Å,2.1 × 150 mm,;
流動(dòng)相: 0.1%甲酸水溶液,;
柱 溫:26℃;
流 速:0.2 mL/min,;
進(jìn)樣量:2 μL,。
質(zhì)譜條件
離子源:ESI+;電噴霧電壓:5500 V,;霧化氣壓力:45 psi,;氣簾氣壓力:10 psi;輔助氣壓力:45 psi,;離子源溫度:330℃,;采集方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)。
表1. 丙烯酰胺質(zhì)譜參數(shù)
物質(zhì)名稱 | Q1 | Q3 | CE/V |
丙烯酰胺 | 72 | 55 | 15 |
44 | 15 | ||
D3-丙烯酰胺 | 75 | 58 | 16 |
44 | 25 |
結(jié)果與討論
線性關(guān)系
分別配制濃度為0.01 mg/L,、0.05 mg/ L,、0.1 mg/L、0.5 mg/L,、1 mg/L,、3 mg/L的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(內(nèi)標(biāo):0.1 mg/L),進(jìn)行液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜檢測(cè),,以各標(biāo)準(zhǔn)溶液的丙烯酰胺進(jìn)樣濃度(mg/L)為橫坐標(biāo),,以丙烯酰胺的峰面積與內(nèi)標(biāo)D3-丙烯酰胺的峰面積比值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,如圖2所示,,擬合參數(shù)如表2,。
表2. 丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限
化合物名稱 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 | 相關(guān)系數(shù) | 檢出限(mg/L,S/N = 3) |
丙烯酰胺 | Y=9.41X + 0.0706 | 0.9999 | 0.005 |
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
由表3可知,,采用固相萃取結(jié)合液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法檢測(cè)丙烯酰胺,,內(nèi)標(biāo)法定量,丙烯酰胺的加標(biāo)回收率在100% ~ 115%之間,,滿足檢測(cè)要求,。
表3.丙烯酰胺加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3)
物質(zhì)名稱 | 添加水平 | 出峰時(shí)間 | 平均回收率(%) | RSD(%) | ||
薯片 | 油條 | 薯片 | 油條 | |||
丙烯酰胺 | 2 mg/kg | 3.56 | 108.6 | 113.6 | 3.33 | 2.77 |
結(jié)論
本實(shí)驗(yàn)依據(jù)《食品中丙烯酰胺的測(cè)定》GB 5009.204-2014中首一法——穩(wěn)定性同位素稀釋的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法建立了食品中丙烯酰胺的檢測(cè)方法,并用內(nèi)標(biāo)法結(jié)合LC-MS/MS對(duì)食品中丙烯酰胺含量進(jìn)行了測(cè)定,。當(dāng)加標(biāo)量為2.0 mg/kg時(shí),,回收率在100% ~ 115%之間,符合要求,。
附:相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格描述 | 包裝數(shù)量 | 訂貨號(hào) |
Venusil® MP C18 | 5μm,100Å, 2.1×150 mm | 1支 | VA951502-0 |
Cleanert® PEP | 200mg/6mL | 30支 | PE2006 |
Cleanert®SAS | 200mg/3mL | 50支 | SS2003 |
Qdaura®卓睿全自動(dòng)固相萃取儀 | 24位,,四通道 | 1臺(tái) | SPE-40 |
氮吹儀 | 15位 | 1臺(tái) | NV15-M |
1.5 mL樣品瓶 | 短螺紋透明帶書寫處 32×11.6mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 mL樣品瓶蓋 | 9mm中心孔藍(lán)蓋,紅色橡膠/米色PTFE隔墊 45°Shore A; 1.0mm | 100/pk | 0915-1819 |
針式過濾器(Nylon) | 單膜,,13mm,,0.22µm | 200個(gè)/包 | AS021320 |
一次性注射器 | 2 mL無針頭 | 100支/包 | LZSQ-2ML |
甲醇 | 4L/瓶,色譜純 | 4×4L/箱 | AH230-4 |
正己烷 | 4L/瓶,,HPLC級(jí) | 4×4L/箱 | AH216-4 |
相關(guān)產(chǎn)品
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