高效液相色譜早期使用隔膜和停流進樣器,裝在色譜柱入口處,,現(xiàn)在大都使用六通進樣閥或自動進樣器,。進樣裝置要求:密封性好,死體積小,,重復性好,保證中心進樣,,進樣時對色譜系統(tǒng)的壓力,、流量影響小。
HPLC進樣方式可分為:隔膜進樣、停流進樣,、閥進樣,、自動進樣。
1.隔膜進樣,。用微量注射器將樣品注入專門設計的與色譜柱相連的進樣頭內(nèi),,可把樣品直接送到柱頭填充床的中心,死體積幾乎等于零,,可以獲得的柱效,,且價格便宜,操作方便,。但不能在高壓下使用(如10MPA以上),;此外隔膜容易吸附樣品產(chǎn)生記憶效應,使進樣重復性只能達到1~2%,;加之能碉各種溶劑的橡皮不易找到,,常規(guī)分析使用受到限制。
2.停流進樣,??杀苊庠诟邏合逻M樣。但在HPLC中由于隔膜的污染,,停泵或重新啟動時往往會出現(xiàn)“鬼峰”,,另一缺點是保留時間不準。在以峰的始末信號控制餾分收集的制備色譜中,,效果較好,。
3.閥進樣。一般HPLC分析常用六通進樣閥,,其關(guān)鍵部件由圓形密封墊子(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成,。由于閥接頭和連接管死體積在存在,柱效率低于隔膜進樣(約下降5~10%左右),,但耐高壓(35~40MPA),,進樣量準確,重復性好(0.5%),,操作方便,。
六通閥進樣方式有部分裝液法和*裝液法兩種。
?、儆貌糠盅b液法進樣時,,進樣量應不大于定量環(huán)體積的50%(多75%),并要求每次進樣體積準確,、相同,。此法進樣的準確度和重復性決定于注器取樣的熟練程度,,而且易產(chǎn)生由進樣引起的峰展寬。
?、谟?裝液法進樣時,,進樣量應不小于定量環(huán)體積的5~10倍(少3倍),這樣才能*置換定量環(huán)內(nèi)和流動相,,消除管壁效應,,確保進樣的準確度及重復性。
六通閥使用和維護注意事項
?、贅悠啡芤哼M樣前必須用0.45UM濾膜過濾,,以減少微粒對進樣閥的磨損。
?、谵D(zhuǎn)動閥芯時不能太慢,,更不能停留在中間位置,否則流動相受阻,,使泵內(nèi)壓力劇增,,甚至超過泵的大壓力;轉(zhuǎn)到進樣位時,,過高的壓力將使柱頭損壞,。
③為防止緩沖鹽和樣呂殘留在進樣閥中,,每次分析結(jié)束后應沖洗進樣閥,。通常可用水沖洗,,或先用能溶解樣品的溶劑沖洗,,再用水沖洗。
4.自動進樣,。用于大量樣品的常規(guī)分析,。
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