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多糖的分離和純化
經(jīng)過(guò)前期對(duì)多糖的提取,，去除蛋白質(zhì),、色素、小分子等物質(zhì)得到粗多糖，而這些粗多糖其實(shí)是由很多分子量,、結(jié)構(gòu)不同的多糖混合而成,。為了得到純的多糖即均一性多糖，仍需進(jìn)一步對(duì)這些粗多糖進(jìn)行分離純化,。
1,、分步沉淀法
多糖的結(jié)構(gòu)和分子量不同，其極性大小不同,，在有機(jī)溶劑（如醇或酮）中的溶解度不同,，根據(jù)這一原理，可以依此增加醇濃度,，從而將多糖按分子量從大到小的沉淀出來(lái),。但是分級(jí)沉淀法一般得不到均一性多糖。仍需要借助柱層析法等進(jìn)一步純化,，方可得到均一性的多糖,。
2、柱層析法
要獲得均一性的多糖,，一般是先經(jīng)過(guò)陰離子交換柱進(jìn)行粗步純化,，然后再用凝膠柱進(jìn)一步純化。有些多糖也采用大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行純化,。下面對(duì)這三種柱層析法進(jìn)行詳細(xì)介紹,。
3、陰離子交換法
一般使用陰離子交換柱對(duì)真菌,、藻類和高等植物的多糖進(jìn)行初步分離,。陰離子交換色譜常用的介質(zhì)有DEAE-纖維素、DEAE-瓊脂糖凝膠,、DEAE-葡萄糖凝膠,。常用的有DEAE-52和DEAE-Sepharose。例如用DEAE-52柱對(duì)大杯香菇等菌類,、玉米等植物,、桑黃等藻類粗多糖進(jìn)行分離純化。使用DEAE-52填料進(jìn)行多糖的初步分離純化,，該柱子一般直徑偏大,，其中以2.6cm多，操作過(guò)程中流動(dòng)相的流速也較快,，流速一般在0.7-2ml/min之間,，以1ml/min多，至于柱子的長(zhǎng)度,，選擇范圍較廣，從25-100cm不等。DEAE-Sepharose柱也常被用在對(duì)菌類,、植物和藻類粗多糖的初步分離純化中,，在選擇層析柱的直徑、流速和長(zhǎng)度的方面與DEAE-52相似,。DEAE-52或DEAE-Sepharose柱的流動(dòng)相都是純水和不同濃度的NaCl溶液,。
4、凝膠色譜法
凝膠色譜法根據(jù)被分離組分尺寸大小與凝膠的孔徑關(guān)系實(shí)現(xiàn)分離,，類似于分子篩的作用,。常用的凝膠有葡聚糖凝膠（SephadexG）、SephadexLH-20,、聚丙烯酸凝膠ToyopearlHW等,。多糖的進(jìn)一步分離往往會(huì)選擇用各種凝膠進(jìn)行分離純化。選擇使用哪一種凝膠對(duì)多糖進(jìn)行純化的標(biāo)準(zhǔn)是多糖的分子量,，不同種類和型號(hào)的凝膠能夠分離多糖類型和分子量范圍不同,。凝膠柱的柱子規(guī)格常具有長(zhǎng)而細(xì)的特點(diǎn)，直徑以1.6cm偏多,。無(wú)論什么類型的凝膠柱,，流動(dòng)相多為蒸餾水或者一定濃度的NaCl溶液。
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