Vescent D2-125激光伺服器在生物領(lǐng)域的應(yīng)用典型案例

科羅拉多州立大學(xué)(Colorado State University,CSU),，David Winters博士借助Vescent D2-125激光伺服器在單像素成像的生物領(lǐng)域獲得了很大的進展,。

針對單像素成像的生物領(lǐng)域,，David Winters博士討論了新的單像素成像方法（SPIFI方法）,，其根本原理是通過基于激光計量和頻率的合成理念，測量小位移的中心頻率的光脈沖，類似脈沖受激拉曼散射，使得脈沖在探測瞬態(tài)光學(xué)磁化率時獲得位移,。通過多路復(fù)用空間頻率投影來實現(xiàn)這一點，實現(xiàn)在沒有成像探測器的情況下進行快速二維成像,。若不使用成像探測器,，則對散射的靈敏度大大降低，則使得該方法可以應(yīng)用于散射生物組織的深層,。重要的是整套系統(tǒng)的光學(xué)部分儀器搭建,，他在光學(xué)成像的兩個領(lǐng)域中所做的工作是利用高靈敏度拉曼測量測量小的光學(xué)頻移，以及利用頻率復(fù)用空間信息的單元素探測器進行快速的一維和二維成像,。這種技術(shù)都試圖將光學(xué)成像的適用性應(yīng)用到更廣泛的生物領(lǐng)域,。拉曼散射廣泛應(yīng)用于化學(xué)樣品表征技術(shù)，因為它是一種內(nèi)源性的對比方法,，不需要使用染料或標(biāo)記來實現(xiàn)化學(xué)特異性成像,。

在光路搭建工作中，他從一個新的方向來研究拉曼測量,。其根本原理是通過電子響應(yīng)產(chǎn)生了依賴于時間的折射率,，采集光脈沖時，會導(dǎo)致探針脈沖的中心光頻率發(fā)生小的偏移,。因此，測量拉曼活性分子的小濃度的問題就變成了測量小的光頻移,。他把光頻移轉(zhuǎn)換成更容易測量的量,，即很容易地把光脈沖中心頻率的變化轉(zhuǎn)換成光強的變化。

圖1 光學(xué)鎖相環(huán)流程圖

圖中PS為移相器,，AM為調(diào)幅器,。射頻信號用藍色實線表示，控制信號用藍色虛線表示,，光纖用黃色表示,。待測脈沖從左下部進入光纖,，然后進行對半調(diào)制，后在匹配的光電探測器上檢測到,，Servo為Vescent D2-125伺服系統(tǒng),。

激光由一對InGaAs激光二極管(Thorlabs DET10C)發(fā)射，以得到調(diào)制器主動極化軸上的光源,。其產(chǎn)生的差分信號輸入至加法放大器(SRS SIM980),，這個差分信號即為誤差信號，進而將差分信號耦合到伺服系統(tǒng)的輸入(Vescent D2-125),。則Vescent伺服系統(tǒng)的輸出參考電壓,，終用于驅(qū)動振幅的壓控振蕩器(VCO)(微型電路ZX95-890C)調(diào)制器。其中伺服參數(shù)和優(yōu)化參數(shù)的設(shè)置通過基于該調(diào)制器驅(qū)動正弦波在重復(fù)率與相位的調(diào)整電子信號獲得,，使得脈沖調(diào)制的峰值及斜率進行采樣衰減,。

圖2  鎖相噪聲分析

藍色線為用普通光學(xué)鎖相測量的拉曼信號。綠色線為使用本文算法處理得到的時態(tài)數(shù)據(jù),。

圖3  SPIFI裝置示意圖

SPIFI方法中Vescent伺服系統(tǒng)的根本目的是驅(qū)動振幅壓控振蕩器(VCO),，以實現(xiàn)在不同的橫向位置對不同頻率的線聚焦進行調(diào)制，將目標(biāo)空間信息編碼到線聚焦上,。實現(xiàn)快速動態(tài)捕獲,，這種成像速度的提高為成像提供了新的可能性成像，從而逐步代替昂貴的陣列檢波器,。由于SPIFI信號對其在時間信號中的位置進行編碼,，通過調(diào)制，一旦將目標(biāo)傳輸函數(shù)刻印在波束上,，其對散射的敏感性就會大大降低,。

圖4  (a)圖為熒光吸收，(b)圖為熒光發(fā)射模式下,，熒光墨水在載玻片上的SPIFI圖像

應(yīng)用該一維SPIFI成像系統(tǒng)可以替代光柵或階段掃描,，提高了成像速度。在簡單的SPIFI成像系統(tǒng)中,，使用光柵對輸入光的光譜進行空間分散,，然后應(yīng)用位置相關(guān)的時間調(diào)制，將光束簡單地收集在光電探測器上,。然后可以從光電探測器信號的電子光譜中恢復(fù)光譜線,。利用這種*的調(diào)制器結(jié)構(gòu)，還可以通過用這種光譜調(diào)制光束照射樣品來進行高光譜成像,。實驗論證在采集之前,，采集到的光的頻譜會被樣本的響應(yīng)調(diào)制，然后將該光譜響應(yīng)編碼到信號的RF頻譜中。實驗證明了對各種樣品類型的都具備較好的成像能力,，無論是熒光樣品還是生物標(biāo)本,。

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