【產品名稱】

通用名：牛羊口蹄疫病毒O型抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Bovine and sheep Foot and Mouth Disease Virus O （ELISA）

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒,、96T×2/盒,、96T×5/盒

【預期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus,，FMDV）引起的偶蹄動物的一種急性、熱性,、高度接觸性傳染病,，其特征為口腔黏膜、蹄部、乳房皮膚發(fā)生水泡和爛斑,。

本試劑用于檢測牛羊血清中口蹄疫病毒O型抗體,，可用于口蹄疫病毒O型疫苗免疫效果評價。

【原    理】

    本試劑盒由預包被口蹄疫病毒O型抗原的酶標板,、酶標記物及其他配套試劑組成,，應用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測牛羊血清樣本中口蹄疫病毒O型抗體。實驗時在酶標板中加入待檢樣本和抗體工作液,，經溫育后洗滌除去未結合的其他成分后,；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合,；再經洗滌除去未結合的酶標記物,，在孔中加TMB底物液，若樣品中含有口蹄疫病毒O型抗體則將阻斷抗體工作液與酶標板上抗原結合,，從而使后續(xù)反應不出現顯色,；反之則出現顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關,；加入終止液終止反應后,，產物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,， 即可知樣品是否含有口蹄疫病毒O型抗體,。

【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個月,。

 包被板開封后請于2～8℃避光保存,，避免受潮。使用期限為2個月,。

【適用儀器】 含450nm,、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備,，可調微量移液器,。

【樣品準備】

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮,，無溶血,、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存,，長期需置-20℃保存,。

2.待檢血清樣本恢復室溫、混勻待用,。陰,、陽性對照不用稀釋,。

3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液),。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條,，設陰性/陽性對照各2孔,，未用的板條盡快密封，2～8℃保存,。

3.陰,、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl,；樣品孔每孔先加入45μl工作洗滌液,再加入5μl血清樣本,。

4.每孔加抗體工作液50μl，混勻,，蓋好蓋板膜,，置37℃（推薦水浴）避光反應30分鐘,。

5.甩去孔內液體,，每孔加350 ul工作洗滌液，靜置30秒后棄去,，重復洗滌5次,，后一次拍干。

6.每孔加酶標記物100μl,，蓋好蓋板膜,，置37℃避光反應30分鐘。

7.洗滌,，同步驟5,。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,，混勻,，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應15分鐘,。

9.每孔加終止液50μl,，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）,。

【參考值】 實驗正常的情況下,，陰性對照吸光值≥0.8，陽性對照吸光值≤陰性對照吸光值×50%,。

【檢驗結果的解釋】

1. PI（阻斷率）=（1- 陰性對照平均A值(樣本A值)）×100%,，PI≥50%為陽性；PI＜50%為陰性,。

2.本實驗結果為陰性時表明抗體水平不足,，建議補打相應疫苗。

【試驗方法的局限性】

    該試驗僅作為定性檢測牛羊血清中口蹄疫病毒O型抗體,，根據PI值高低可作抗體水平強,、中、弱的粗略評估,。

牛羊口蹄疫病毒O型抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）【注意事項】

1.實驗操作時需戴手套,、穿工作衣，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理,。

2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物,，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗,。

3.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存,。

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶,，使用時需恢復至室溫以*溶解。

5.洗滌時各孔均需加滿液體,，防止孔口有游離酶不能洗凈,。

6.用于檢測的樣品應保持新鮮。

7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準,。

8.不同批號試劑組分不得混用,。