【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名：牛羊口蹄疫病毒O型抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Bovine and sheep Foot and Mouth Disease Virus O （ELISA）

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒,、96T×2/盒、96T×5/盒

【預(yù)期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus,，F(xiàn)MDV）引起的偶蹄動(dòng)物的一種急性,、熱性,、高度接觸性傳染病，其特征為口腔黏膜,、蹄部,、乳房皮膚發(fā)生水泡和爛斑。

本試劑用于檢測(cè)牛羊血清中口蹄疫病毒O型抗體,，可用于口蹄疫病毒O型疫苗免疫效果評(píng)價(jià),。

【原    理】

    本試劑盒由預(yù)包被口蹄疫病毒O型抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)牛羊血清樣本中口蹄疫病毒O型抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入待檢樣本和抗體工作液,，經(jīng)溫育后洗滌除去未結(jié)合的其他成分后,；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,，在孔中加TMB底物液，若樣品中含有口蹄疫病毒O型抗體則將阻斷抗體工作液與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,，從而使后續(xù)反應(yīng)不出現(xiàn)顯色,；反之則出現(xiàn)顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負(fù)相關(guān),；加入終止液終止反應(yīng)后,，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,， 即可知樣品是否含有口蹄疫病毒O型抗體,。

【儲(chǔ)存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個(gè)月,。

 包被板開(kāi)封后請(qǐng)于2～8℃避光保存,，避免受潮。使用期限為2個(gè)月,。

【適用儀器】 含450nm,、630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備,，可調(diào)微量移液器,。

【樣品準(zhǔn)備】

1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮,，無(wú)溶血,、無(wú)污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存,，長(zhǎng)期需置-20℃保存,。

2.待檢血清樣本恢復(fù)室溫,、混勻待用。陰,、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋,。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液),。

【檢驗(yàn)方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條,，設(shè)陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔,，未用的板條盡快密封，2～8℃保存,。

3.陰,、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照50μl,；樣品孔每孔先加入45μl工作洗滌液,再加入5μl血清樣本,。

4.每孔加抗體工作液50μl，混勻,，蓋好蓋板膜,，置37℃（推薦水浴）避光反應(yīng)30分鐘,。

5.甩去孔內(nèi)液體,，每孔加350 ul工作洗滌液，靜置30秒后棄去,，重復(fù)洗滌5次,，后一次拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,，蓋好蓋板膜,，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌,，同步驟5,。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,，混勻,，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)15分鐘,。

9.每孔加終止液50μl,，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A值）。

【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,，陰性對(duì)照吸光值≥0.8,，陽(yáng)性對(duì)照吸光值≤陰性對(duì)照吸光值×50%。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1. PI（阻斷率）=（1- 陰性對(duì)照平均A值(樣本A值)）×100%,，PI≥50%為陽(yáng)性,；PI＜50%為陰性。

2.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)表明抗體水平不足,，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗,。

【試驗(yàn)方法的局限性】

    該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)牛羊血清中口蹄疫病毒O型抗體，根據(jù)PI值高低可作抗體水平強(qiáng),、中,、弱的粗略評(píng)估。

牛羊口蹄疫病毒O型抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）【注意事項(xiàng)】

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套,、穿工作衣,，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來(lái)水沖洗,。

3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開(kāi)袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存,。

4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶,，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解。

5.洗滌時(shí)各孔均需加滿(mǎn)液體,，防止孔口有游離酶不能洗凈,。

6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。

8.不同批號(hào)試劑組分不得混用,。