產(chǎn)品簡介: EDTA 是一種相對較好的螯合脫鈣劑,,對組織結(jié)構(gòu)影響小,,可以較好的保存組織的某 些酶類,經(jīng) EDTA 脫鈣后的組織可以進行免疫組化和原位雜交染色,。但是該法脫鈣速度太慢,, 一般脫需要數(shù)周至數(shù)月
保存條件: 2~8°C 保存。
操作流程: 1,、骨組織脫鈣時,,取材不易過厚,一般大約 5mm,;
2,、組織固定后,用 PBS 清洗 3 次,,每次 20min,;
3、組織用蒸餾水洗清洗 3 次,,每次 20min,;
4、組織轉(zhuǎn)移至 20~30 倍體積的 EDTA 脫鈣液中,,脫鈣 10~30 天或更長時間,。如果想加快 脫鈣速度,可以置于 37°C 進行脫鈣,。如果必要,,更換新的 EDTA 脫鈣液繼續(xù)脫鈣,多數(shù)組 織脫鈣 2 周~3 個月即可,,每周更換一次,,直至終點;
5,、用蒸餾水沖洗數(shù)次,;
6,、常規(guī)脫水、包埋,。
注意事項: 1,、 厚度 5mm 的骨組織塊脫鈣時間一般脫鈣 10~30 天即可。
2,、 適當加溫能加快脫鈣的速度,,一般不應(yīng)超過 37~40°C,溫度過高容易使骨組織造成松 散解體,,尤其不可大于 60°C,。
3、脫鈣應(yīng)*,,防止脫鈣不足或過度,。脫鈣程度應(yīng)控制在不影響組織切片的同時盡量縮短 脫鈣時間,以免脫鈣過長引起組織損害,。
4,、 脫鈣用具避免使用金屬容器,盡量使用玻璃容器,。
5,、 骨組織脫鈣應(yīng)先固定后脫鈣或脫鈣固定同時進行,不應(yīng)先脫鈣后固定,,以便減少組織的 損傷程度,。
6、 每隔一段時間檢測一次脫鈣程度,,避免脫鈣過度,,脫鈣過度會增加組織的損傷程度,影 響染色結(jié)果,。
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