上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司經(jīng)過(guò)數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā),、生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)為一體的專業(yè)化生物工程公司,。公司新引進(jìn)細(xì)胞上千株,，其中人的已通過(guò)STR鑒定的有幾百株,，歡迎各位選購(gòu)。,。,。。,。,。

產(chǎn)品名稱：NIH-3T3-GFP小鼠成纖維綠色標(biāo)記|NIH-3T3細(xì)胞

包裝：內(nèi)層無(wú)菌自封袋；防壓泡沫盒,；外層防壓保溫氣泡袋,；說(shuō)明書

細(xì)胞來(lái)源：ATCC,、sciencell、ICLC

貨期：1-2周

運(yùn)輸方式：快遞運(yùn)輸

售后：收到細(xì)胞后12天,，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問(wèn)題（如污染,，死亡，快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí),，應(yīng)出具書面質(zhì)量問(wèn)題報(bào)告并及時(shí)通知銷售人員,，我們將盡快為您解決！

NIH-3T3-GFP小鼠成纖維綠色標(biāo)記|NIH-3T3細(xì)胞

?三,、細(xì)胞生長(zhǎng)條件：

一,、組成：

組份 數(shù)目

細(xì)胞 1 T-25瓶

細(xì)胞說(shuō)明書 一份

二、細(xì)胞簡(jiǎn)介：

生長(zhǎng)特性： 貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞來(lái)源： 從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn)

培養(yǎng)條件： 培養(yǎng)基：1640 +10%FBS（推薦德國(guó)BI 04-002-1A

優(yōu)等胎牛血清）

氣相：空氣95%,，二氧化碳5%

溫度：37℃

培養(yǎng)： 一,、貼壁細(xì)胞

1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行2-3小時(shí)的緩沖,，.然后置于無(wú)菌操作臺(tái),，打開瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉,，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代；

2.待細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底面積80%-90%,，需要對(duì)其進(jìn)行傳代,，di一次傳代比例為1:2。

3傳代步驟：將0.25%含EDTA胰酶置于37°預(yù)熱,，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS，輕晃洗滌后棄去,。往瓶中加1ml預(yù)熱好的胰酶,，置于37°孵育消化（di一次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓,、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為佳消化時(shí)間,，記錄佳消化時(shí)間，以便于下次消化）,，消化好后加入1ml*培養(yǎng)基終止消化,。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之*脫落,，然后收集細(xì)胞懸液,，1200rpm離心3min，棄上清，加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，進(jìn)行傳代,。

二、懸浮細(xì)胞

1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒,，然后置于無(wú)菌操作臺(tái),，打開瓶口，輕輕吹打后,，將其中的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中,，然后1200rpm離心3min，去上清,；

2.將離心好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T-25瓶中,，并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基，然后將其置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液（離心后去舊液,，加入新鮮培養(yǎng)基）；

3.顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)目比較多時(shí),，對(duì)其進(jìn)行傳代,，di一次傳代比例為1:2（離心后平均分成兩瓶培養(yǎng)）。

細(xì)胞總數(shù)： 1~3*106

傳代周期： 2-3天

傳代比例： 1:2~1:4

換液頻率： 2-3天

凍存液： 90%FBS+10%DMSO

四,、注意事項(xiàng)：

1 收到細(xì)胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞,、漏液、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,。

2 瓶中運(yùn)輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用，請(qǐng)換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)

3 對(duì)于貼壁細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞漂浮,，置于培養(yǎng)箱隔夜觀察，大部分漂浮細(xì)胞重新貼壁,，表明細(xì)胞活力正常,，繼續(xù)培養(yǎng)，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉,；若大部分細(xì)胞仍然不貼壁,，將漂浮的細(xì)胞離心收集,，用臺(tái)盼藍(lán)染色鑒定細(xì)胞活力,，并與本公司銷售人員及時(shí)聯(lián)系。

4 建議客戶收到細(xì)胞后不同倍鏡各拍幾張細(xì)胞的照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，如細(xì)胞狀態(tài)出現(xiàn)問(wèn)題請(qǐng)于72h內(nèi)與本公司銷售聯(lián)系，以便于更好的幫您解決問(wèn)題，超過(guò)時(shí)間我段,，本公司則默認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好,，不免費(fèi)對(duì)后續(xù)細(xì)胞狀態(tài)問(wèn)題進(jìn)行售后。

做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的同學(xué)看過(guò)來(lái),。

選擇上海琛藝生物細(xì)胞有3個(gè)理由：

1,、細(xì)胞狀態(tài)好，形態(tài)佳,，易成活,，是市面上比較好養(yǎng)的細(xì)胞之一;

2、物流迅速,，復(fù)蘇好后發(fā)貨,，次日就能到;

3、使用我司推薦的進(jìn)口品牌血清進(jìn)行培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),，效果更佳,。

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專業(yè)技術(shù)人員萬(wàn)工收藏的細(xì)胞培養(yǎng)小技巧:

1. 買細(xì)胞要去靠譜的地方買,，比如 ATCC 或者上海琛藝,。一般上面會(huì)有針對(duì)細(xì)胞的介紹，這樣培養(yǎng)之前可以了解細(xì)胞正常生長(zhǎng)的狀態(tài)圖,、傳代,、培養(yǎng)基的類型等。

2. 不管是買的細(xì)胞,，還是別人惠贈(zèng)的細(xì)胞,，剛拿到手趕緊的做兩件事：檢測(cè)是否有支原體污染;迅速擴(kuò)增凍存，凍存細(xì)胞復(fù)蘇后第二天*更換一次培養(yǎng)基,。

3. 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染迅速處理掉,，特別是當(dāng)你養(yǎng)了很多種細(xì)胞時(shí)。細(xì)菌污染,、真菌污染很容易發(fā)現(xiàn),，支原體污染的話，細(xì)胞會(huì)長(zhǎng)的慢,，可以買個(gè)支原體檢測(cè)的試劑盒定期檢測(cè)一下,。

4. 不同細(xì)胞生長(zhǎng)周期不同。有的生長(zhǎng)很快,，比如說(shuō) MDA-MB-231,，傳代的時(shí)候取離心懸液的十分之一就已經(jīng)足夠了。有的又是特別慢,，比如 BT474,，傳代是一分二,，復(fù)蘇起始的時(shí)候兩周多才能長(zhǎng)滿。這就需要要在培養(yǎng)細(xì)胞的過(guò)程中多多摸索,。

5. 對(duì)于嬌弱的細(xì)胞,，就得細(xì)心呵護(hù)。胰酶消化不能過(guò)久,，吹得時(shí)候要輕柔,，離心時(shí)候也要注意轉(zhuǎn)速和時(shí)間。每天都要去看一下細(xì)胞,，肉眼觀察培養(yǎng)基狀況,、顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況。記住,，是每天,。