本文摘自和光純藥時報 Vol.87 No.4（2019年10月號）,，由麻布大學獸醫(yī)學部 解剖第二研究室 小澤秋沙執(zhí)筆撰寫,。

本法是一種可使臨床檢查或研究中應用廣泛的組織化學染色蘇木精-伊紅（HE）或Masson法（MT）染色的組織切片脫色，并可重新用于其他染色的方法,。

迄今為止，每一種組織化學染色通常都需要使用至少一片組織切片,，因此必須準備與組織化學染色方法相對應數(shù)量的組織切片,。然而，由于制備組織切片時的技術(shù)熟練度以及組織樣品狀態(tài),、大小等原因,，有時很難備齊多個適合評價的組織切片。另外,，在評價同一細胞時一般使用連續(xù)切片的方法,，然而即使獲得了合適的連續(xù)切片，想要觀察的組織結(jié)構(gòu)和細胞內(nèi)結(jié)構(gòu),，也可能不同時存在于兩個相鄰的組織切片上,。

在這種情況下，重復利用已有觀察特征的細胞或結(jié)構(gòu)的組織切片就會十分有用,。HE染色可獲取組織大致特征,，因此是*染色的代表染色法之一，如果可以對HE染色后的目標結(jié)構(gòu)的組織切片進行重新染色,，便可以提高臨床檢查以及研究結(jié)果的準確性,。

至今為止，組織切片脫色通常使用乙醇與鹽酸的混合溶液,、含有草酸,、高錳酸鉀的溶液,。然而，這些脫色方法都會影響組織切片在脫色后的再染色效果,。

實際上,，在乙醇中加入鹽酸的溶液不能對蘇木精等染料充分脫色。而通過高錳酸鉀,、草酸脫色則會對組織切片造成很大的損害,，重新染色時組織結(jié)構(gòu)可能會因為切片剝離被破壞，從而限定了再染色的方法,，也限制了組織切片的再利用,。因此，學界期待開發(fā)一種幾乎不會損害組織切片,，并且可以對多種染色法進行脫色后再染色的全新方法,。

這次，F(xiàn)UJIFILM Wako開發(fā)的deColorizing Solution,，可以對HE染色后確認了組織狀態(tài)（特定的結(jié)構(gòu)及細胞的存在）的切片脫色,，再重新用于其他染色，從而能夠從同一組織切片中獲得更多信息,。該方法的特點在于可以對原本難以脫色的蘇木精,、鐵蘇木精進行脫色。

使用方法：首先將染色后密封的載玻片標本浸入二甲苯等有機溶劑中,，直至蓋玻片自然剝落,。請注意，在此過程中若是強行分離蓋玻片可能會破壞組織切片,。

另外,，若在組織切片上仍然殘留有封固劑的狀態(tài)下就進行下一步驟，水溶性色素在水合后不會脫落,，會降低隨后使用deColorizing Solution進行脫色的效果,，因此必須使用二甲苯等有機溶劑充分浸泡。必須注意的是,，標本越舊，封固劑的固化越牢固,，封固劑就越難去除,。

其次，將組織切片依次用各種濃度的乙醇進行水合,，后浸入蒸餾水中,。在水合過程中，伊紅等水溶性色素基本脫色,，組織切片上僅殘留染色的蘇木精,。將殘留蘇木精染色的組織切片浸入按照使用濃度稀釋的deColorizing Solution 1中,。脫色主要取決于組織切片染色后保存的時長，但蘇木精在室溫下于deColorizing Solution 1中浸漬1 h基本就能脫色,。

鐵蘇木精脫色時需要在deColorizing Solution 1中浸漬1 h后使用蒸餾水清洗3次,，然后浸漬于deColorizing Solution 2。通過光學顯微鏡確認脫色程度（染色殘留情況）,，確認不會影響下次染色后,，浸漬于蒸餾水并清洗3次，這時可用于重新染色,。

目前,，在使用deColorizing Solution脫色后，可以使用的再染色方法已確認的有HE染色,、PAS染色,、MT染色和免疫組織化學染色。

圖1和圖2分別是小鼠海馬體以及肝臟在HE染色后使用deColorizing Solution按照上述步驟脫色后的圖片,。如圖１A及圖２A所見,，包括細胞核在內(nèi)，被蘇木精染色的部分在圖1B及圖2B中大部分已被脫色,。

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                                   圖1.  使用deColorizing Solution 1脫色HE 染色后的組織切片并重新染色

                                   A：HE染色的小鼠海馬體組織圖像

                                   B：使用deColorizing Solution 1脫色后與A相同位置的組織圖像

                                   C：脫色后使用抗Iba1抗體進行熒光免疫組織化學染色后與A和B相同位置的組織圖像

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                                   圖2. 使用deColorizing Solution 1脫色HE 染色后的組織切片并重新染色

                                   A：HE染色的小鼠肝臟組織圖像

                                   B：使用deColorizing Solution 1脫色后與A相同位置的組織圖像

                                   C：脫色后使用抗PCNA抗體進行免疫組織化學染色后與A和B相同位置的組織圖像

另外,，圖3為小鼠肝臟以及腎臟在MT染色后使用deColorizing Solution 1和2脫色后的圖像。圖3A和C中包括細胞核在內(nèi),，被鐵蘇木精染色的大部分在圖3B和D中均已*脫色,。

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                                   圖3. 使用deColorizing Solution 1和2對MT 染色后的組織切片脫色

                                   A：MT染色后的小鼠肝臟組織圖像

                                   B：使用deColorizing Solution 1和2脫色后與A相同位置的組織圖像

                                   C：MT染色后的小鼠腎臟的組織圖像

                                   D：使用deColorizing Solution 1和2脫色后與C相同位置的組織圖像

圖1C為小鼠海馬體脫色后使用抗Iba1抗體（FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation）進行免疫組織化學染色的圖片，圖1A和B為同一位置的圖像,。如圖可見,，脫色后的海馬體切片仍然可以檢測出Iba1陽性小膠質(zhì)細胞突起。圖2C為小鼠肝臟脫色后使用抗PCNA抗體進行免疫組織化學染色的圖片,。如圖可見,，陽性PCNA主要在肝細胞的細胞核中表達。

另外,，并未發(fā)現(xiàn)因脫色導致的組織切片破壞等損傷,。

該方法的優(yōu)點在于，大量長期保存在大學,、研究所,、醫(yī)院等的*組織切片，在制備時沒有新型染色方法以及針對新型抗原的抗體,，通過再染色等方法可以重新評價以獲取新的實驗信息,。

目前，deColorizing Solution的應用只適用于HE 染色和MT 染色后的脫色,，但隨著該方法的應用范圍拓展,，脫色法在重復使用組織切片方面的實用性將進一步提高,。

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