快速液相色譜柱用超純硅膠裝填,,雜質含量更低,粒徑分布窄,,含水量控制嚴格,,PH值中性,可以滿足用戶更高的分離需求,。
快速液相色譜柱選擇的條件有這幾個
填料基質
1.硅膠基質:純度高本錢低,,強度大,化學修飾輕易,,但pH值范圍有限,。大多硅膠基質填料在pH2-8之間穩(wěn)定,但經過特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩(wěn)定在pH1.5-10,。
2.聚合物基質:應用pH值范圍寬,,溫度穩(wěn)定(高溫可以達到80度以上),機械強度小,。
顆粒外形
大多現代HPLC填料都是球形顆粒,,但有時是不規(guī)則的顆粒。球形顆粒提供較低的柱壓,、較高的柱效和穩(wěn)定性以及較長的柱壽命在使用高粘度的活動相時;不規(guī)則顆粒有較大比表面積和相對低廉的價格,。
顆粒粒徑
粒徑越小柱效越高、分離度越高,,但同時會導致較高柱壓降,。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復雜樣品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱,。
含碳量
含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例,與比表面積和鍵合覆蓋度等有關,。高含碳量進步柱容量,、分辨率及分析時間,用于要求高分離度的復雜樣品;低含碳量分析時間短,、展現不同的選擇性,,用于快速分析簡單樣品及需要高含水活動相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等,。
孔徑和比表面積
HPLC吸附介質是多孔的顆粒,,盡大多數的反應表面于孔內。因此,,分子必須進進孔內才能被吸附和分離,。
孔徑和比表面積是相輔相成的兩個概念??讖叫”缺砻娣e大,,反之亦然。比表面積大,,增加樣品與鍵合相之間的反應,,增加保存,上樣量和復雜成分的分離度;比表面積小,平衡時間快,,適合梯度分析,。
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