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人乳腺癌阿霉素耐藥細胞；MCF-7/Adr

(產(chǎn)品編號：QMS-h1160)

上海圻明生物科技有限公司

ShangHai QiMing BIOTECHNOLOGY CO.,，LTD.

細胞特性

1） 來源：乳腺癌

2） 形態(tài)：上皮細胞樣,，貼壁生長

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝

運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸,，收到后 

立即轉入液氮凍存或直接復蘇；（2）存活細胞,，收到后應繼續(xù)生長,，傳代達到細

胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。收到細胞后請拍照，

3 天內如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系,。

細胞用途：僅供科研使用。

細胞接收后的處理：

1） 收到細胞后,，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細

胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，在低倍鏡（4 或 5X 物鏡)下進行,，能

準確判斷細胞的傳代密度,。看細胞的形態(tài)請在 10X 和 20×物鏡下,，同時給剛收

到的細胞拍照,，（10×，20×）各 2-3 張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為細

胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù),。

3）觀察好細胞狀態(tài)后，

75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h,。

4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落

或者脫落后抱團生長，可將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h,，然后抽出瓶中

的培養(yǎng)基和未貼壁細胞 1000rpm 離心 5 分鐘,，棄去上清重懸后接種到加有按照

說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和

細胞 1000rpm 離心 5 分鐘,，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說

明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）,。

6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說

明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。 收到細胞后d一次傳代建

議 1：2 傳代 。

細胞培養(yǎng)步驟

1）準備 1640 基礎培養(yǎng)基,，優(yōu)質胎牛血清 10%,，牛胰島素 0.01mg/mL，P/S 青

霉素-鏈霉素 1%,，500ng/mL ADR,。

注意：培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是不含藥物的，待細胞長到 70-80%匯合度時,，去掉

培養(yǎng)液,，加含 400ng/ml 阿霉素藥物的培養(yǎng)液，放入培養(yǎng)箱,，這段時間會有少部

分細胞懸浮起來,，屬于正常情況，通過換液可以去掉,，等細胞長滿就可以消化傳代了,，這時可以一直用含藥物培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞，兩代之后就可以將藥物濃 

度提高到 500ng/ml,，細胞凍存時不要在培養(yǎng)基中加藥物,。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37 攝氏度,，培養(yǎng)箱

濕度為 70%-80%,。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二．細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加

入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補

加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將

細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢

查細胞密度,。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培

養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部

分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止

消化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4

分鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者

瓶中。

注：d一次傳代推薦傳代比例為 1:2,，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決

定,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。

下面 T25 瓶為例,；

1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗瓶底 1-2 次后加入 1ml 胰酶,，細

胞變圓脫落后，加入 2ml *培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

2．1000RPM 離心 5 分鐘去掉上清。用血清重懸浮,，加 DMSO 至終濃度

為 10%,。加入 DMSO 后迅速混勻，按每 1ml 的數(shù)量分配到凍存管中,，注意

凍存管做好標識,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于 1X106個細胞凍存。

3．將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱,，至少 2 個小時以后轉入液

氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

注意事項：

1. 收到細胞后,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,，請立即

與我們聯(lián)系,。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作,，并請注意

防護,，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。