細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)方法

1. 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

1. 應(yīng)遵守慢凍快融的原則,。先將水浴鍋調(diào)至37-37,。5度，取出凍存的細(xì)胞迅速放入后將細(xì)胞面浸至水面以下不斷搖動至融化,。

2. 在無菌臺內(nèi)將*培養(yǎng)基加入50ml的小培養(yǎng)瓶內(nèi),，約5ml左右,，然后用無菌吸管從凍存管內(nèi)取出細(xì)胞，置培養(yǎng)并內(nèi)輕輕搖晃,，使細(xì)胞均勻后置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),。

2. 傳代:

對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好,，以免中和后加入的消化液,，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,，按此比例進(jìn)行消化,，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,，輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后,，輕輕吹打,，使細(xì)胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/p>

一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基,，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。

1. 貼壁細(xì)胞:

2. 懸浮細(xì)胞:

3. 凍存 

將貼壁細(xì)胞消化后離心收集,，懸浮細(xì)胞直接離心收集，以*培養(yǎng)基或胎牛血清重懸細(xì)胞至終濃度約106/ml,。加入10%的DMSO,。以每管1～2ml分裝至凍存管中。用絕熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷凍過夜,。次日保存到液氮中,。