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關(guān)于超聲波細胞破碎的內(nèi)容,。
細胞破碎是指利用外力破壞細胞膜和細胞壁,，使細胞內(nèi)容物包括目的產(chǎn)物成分釋放出來的技術(shù)，是分離純化細胞內(nèi)合成的非分泌型生化物質(zhì)（產(chǎn)品）的基礎(chǔ),。結(jié)合重組DNA技術(shù)和組織培養(yǎng)技術(shù)上的重大進展,，以前認為很難獲得的蛋白質(zhì)現(xiàn)在可以大規(guī)模生產(chǎn)。
但是由于細菌,、酵母,、真菌、植物細胞壁的組成成分不同,，且同類細胞結(jié)成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)也不同,，所以其細胞壁的堅固程度不同。而動物細胞雖沒有細胞壁,，但具有細胞膜,，也需要一定的細胞破碎方法來破膜，達到提取產(chǎn)物的目的,。
細胞破碎方法：
1.機械法
1.1 組織搗碎
將材料配成稀糊狀液,，放置于筒內(nèi)約1/3體積，蓋緊筒蓋,，將調(diào)速器先撥至慢處,，開動開關(guān)后，逐步加速至所需速度,。一般用于動物組織,、植物肉質(zhì)種子、柔嫩的葉芽等,，轉(zhuǎn)速可高達10000rpm/M以上,。由于旋轉(zhuǎn)刀片的機械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。
1.2 勻漿器
先將剪碎的組織置于管中,，再套入研桿來回研磨,，上下移動，即可將細胞研碎,。勻漿器的研缽磨球和玻璃管內(nèi)壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離,。制作勻漿器的材料，除玻璃外,，還可以用硬質(zhì)塑料,、不銹鋼,、人造熒光樹脂等。
此法細胞破碎程度比高速組織搗碎機為高,，適用于量少和動物臟器組織,。
存在的問題：較易造成堵塞的團狀或絲狀真菌，較小的革蘭氏陽性首以及有些亞細胞器,，質(zhì)地堅硬,，易損傷勻漿閥，也不適合用該法處理,。
1.3 研缽
多用于細菌或其他堅硬植物材料,，研磨時常加入少量石英砂，玻璃粉或其他研磨劑,，以提高研磨效果,。
1.4 細菌磨
是一種改良了的研磨器，比研缽具有更大的研磨面積,，而且低部有出口,。操作時先把細菌和研磨粉調(diào)成糊狀，每次加入一小勺,，研磨20-30秒即可將細菌細胞*磨碎。
2.化學(xué)及生物化學(xué)法
2.1 自溶法
在一定PH和適當(dāng)?shù)臏囟认?，利用組織細胞內(nèi)自身的酶系統(tǒng)將細胞破碎的方法,。此過程需較長時間，常用少量防腐劑如甲苯等防止細胞的污染,。
2.2 酶溶法
利用各種水解酶,，如溶菌酶、纖維素酶,、蝸牛酶,、半纖維素酶、脂酶等,，將細胞壁分解,，使細胞內(nèi)含物釋放出來。有些細菌對溶菌酶不敏感,，加入少量巰基試劑或8摩爾尿素處理后,，使之轉(zhuǎn)為對溶菌酶敏感而溶解。
2.3 化學(xué)滲透法
某些有機溶劑（如苯,、甲苯）,、抗生素、表面活性劑,、金屬螯合劑,、變性劑等化學(xué)藥品都可以改變細胞壁或膜的通透性從而使內(nèi)合物有選擇地滲透出來,。其作用機理；化學(xué)滲透取決于化學(xué)試劑的類型以及細胞壁和膜的結(jié)構(gòu)與組成,。
3.物理法
3.1 反復(fù)凍溶法
原理：因突然冷凍,，細胞內(nèi)冰晶的形成及胞內(nèi)外溶劑濃度的突然改變而破壞細胞。
方法：將待破碎的細胞在-20度以下冰凍,，室溫融解,，反復(fù)幾次，由于細胞內(nèi)冰粒形成和剩余細胞液的鹽濃度增高引起溶脹,，使細胞結(jié)構(gòu)破碎,。
3.3 急熱驟冷法
將材料投入沸水中，維持85-90分鐘,，至水浴中急速冷卻,，此法可用于細菌及病毒材料。
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