多肽是一種與生物體內(nèi)各種細(xì)胞功能都相關(guān)的生物活性物質(zhì),它的分子結(jié)構(gòu)介于氨基酸和蛋白質(zhì)之間,,是由多種氨基酸按照一定的排列順序通過(guò)肽鍵結(jié)合而成的化合物,。多肽是涉及生物體內(nèi)各種細(xì)胞功能的生物活性物質(zhì)的總稱,,常常被應(yīng)用于功能分析、抗體研究、尤其是藥物研發(fā)等領(lǐng)域,。多肽合成技術(shù)的出現(xiàn),,讓這些多肽的應(yīng)用領(lǐng)域變得更寬。
多肽的固相合成
多肽的合成是氨基酸重復(fù)添加的過(guò)程,,通常從C端向N端(氨基端)進(jìn)行合成,。多肽固相合成的原理是將目的肽的個(gè)氨基酸C端通過(guò)共價(jià)鍵與固相載體連接,再以該氨基酸N端為合成起點(diǎn),,經(jīng)過(guò)脫去氨基保護(hù)基和過(guò)量的已活化的第二個(gè)氨基酸進(jìn)行反應(yīng),,接長(zhǎng)肽鏈,重復(fù)操作,,達(dá)到理想的合成肽鏈長(zhǎng)度,,后將肽鏈從樹脂上裂解下來(lái),分離純化,,獲得目標(biāo)多肽,。
1、Boc多肽合成法
Boc方法是經(jīng)典的多肽固相合成法,,以Boc作為氨基酸α-氨基的保護(hù)基,,芐醇類作為側(cè)鏈保護(hù)基,Boc的脫除通常采用三(TFA)進(jìn)行,。多肽合成時(shí)將已用Boc保護(hù)好的N-α-氨基酸共價(jià)交聯(lián)到樹脂上,,TFA切除Boc保護(hù)基,N端用弱堿中和,。
肽鏈的延長(zhǎng)通過(guò)二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)活化,、偶聯(lián)進(jìn)行,終采用強(qiáng)酸(HF)法或三氟甲磺酸(TFMSA)將合成的目標(biāo)多肽從樹脂上解離,。在Boc多肽合成法中,,為了便于下一步的多肽合成,反復(fù)用酸進(jìn)行脫保護(hù),,一些副反應(yīng)被帶入實(shí)驗(yàn)中,,例如多肽容易從樹脂上切除下來(lái),氨基酸側(cè)鏈在酸性條件不穩(wěn)定等,。
2,、Fmoc多肽合成法
Carpino和Han以Boc多肽合成法為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)一種多肽固相合成的新方法——Fmoc多肽合成法。
Fmoc多肽合成法以Fmoc作為氨基酸α-氨基的保護(hù)基,。其優(yōu)勢(shì)為在酸性條件下是穩(wěn)定的,,不受TFA等試劑的影響,應(yīng)用溫和的堿處理可脫保護(hù),,所以側(cè)鏈可用易于酸脫除的Boc保護(hù)基進(jìn)行保護(hù),。
肽段的后切除可采用TFA/二氯甲烷(DCM)從樹脂上定量完成,,避免了采用強(qiáng)酸。同時(shí),,與Boc法相比,,F(xiàn)moc法反應(yīng)條件溫和,副反應(yīng)少,,產(chǎn)率高,,并且Fmoc基團(tuán)本身具有特征性紫外吸收,易于監(jiān)測(cè)控制反應(yīng)的進(jìn)行,。Fmoc法在多肽固相合成領(lǐng)域應(yīng)用越來(lái)越廣泛,。
多肽合成服務(wù)種類
多肽合成服務(wù)通常有線性肽合成服務(wù)、多種難肽合成服務(wù),、修飾肽合成服務(wù),、以及部分多肽合成公司還會(huì)提供多肽定制服務(wù),定制出有針對(duì)性的合成肽,。
目前有多肽合成公司提供的線性肽合成可達(dá)150個(gè)氨基酸以內(nèi),,在修飾肽合成上,能提供常見修飾,,磷酸肽,,RGD環(huán)肽,熒光標(biāo)記肽(Cy3,、Cy5,、Fitc、AMC等),,生物素標(biāo)記肽/復(fù)合抗原(MAP)/含D型氨基酸,及各種氨基酸衍生物均可合成,。
多肽產(chǎn)物純度選擇
常見的質(zhì)譜級(jí)多肽純度,一般要求>95%
用于抗體篩選純度,,一般>85%即可
NMR和結(jié)晶試驗(yàn)中,,純度一般>98%
粗品肽,一般>50%即可用于多肽篩選
多肽分類
多肽修飾分類
C端酰胺化(Amidation,C-termainal)
醛基化(Aldehydes)
醇基化(Alcohols)
pNA (p-Nitroanilide)
AMC
C端標(biāo)記技術(shù)
AFC
巰基乙胺化(Cysteamide)
酯基化(Ester)
N-烷基化(N-Alkyl Amides)
N端標(biāo)記技術(shù)
乙?;疉cetylated (Acetylated)
Palmytolyl
HYNIC
生物素標(biāo)記(Biotinylated)
Br乙?;˙romoacetylated)
螯合反應(yīng)(DOTA,DTPA conjugated)
甲醛化(Formylated)
十四烷基,,十八烷基化(Myristoylated)
琥珀酰化,、棕櫚酸化,、蘋果酸化、脂肪酸化等(Succinylated)
熒光標(biāo)記修飾
C端修飾: AFC, AMC, Dap(Dnp), Lys(Dye), pNA, Rh110
N端修飾: Bodipy-FL, Cy3, Cy5, Texas Red, 5-Tamra, 5-lodoacetamido fluorescein Rhodamine 110 and Rhodamine B Luciferin, EDANS FAM, FITC, MCA, Rox, Sulforhodamine 101, 5-TAMRA
環(huán)化反應(yīng)
首尾成環(huán),,中間成環(huán),,特殊成環(huán)(N -> C or Head to Tail)
2對(duì)二硫鍵,3對(duì)二硫鍵(Disulfide (S-S bond formation) .Trisulfide formation)
天然產(chǎn)物活性肽成環(huán)(Cyclic-natural peptides )
甲基化修飾
側(cè)鏈甲基化Lys(For),Lys(Me), Lys(Me)2, Lys(Me)3, Arg(Me)2 symmetrical, D-Tyr(Me),D-Tyr(Et)
N端甲基化(N-Me-Arg,N-Me-Asp, N-Me-Glu, N-Me-Leu, N-Me-Nle, N-Me-Nva, N-Me-Phe, N-Me-S N- Me-Ser, N-Me-Trp, N-Me-Thr, N-Me-Val)
幾種特殊修飾
各種偶聯(lián)(BSA, KLH conjugated peptides for antibody production
磷酸化(Phosphoserine, Phosphothreonine, Phosphotyrosine)
磺化(Sulfated Tyrosine or Serine)
MAPS (Multiple Antigenic Peptide)
糖肽(Glycopeptides)
PEG修飾(PEGylation)
國(guó)肽生物按照客戶定制要求供應(yīng)高品質(zhì)普通多肽。
我們擁有成熟的多肽合成純化方法,,利用SPPS方法和液相合成方法為客戶提供高品質(zhì)多肽,。我們的服務(wù)特點(diǎn)是:
1. 純度:我們提供粗品肽和純度純度為70%,75%,,80%,85%,90%,95%,98%,99%的純品多肽,。
2.脫鹽和轉(zhuǎn)鹽:根據(jù)客戶要求,我們可以對(duì)多肽進(jìn)行脫TFA鹽處理,,也可以轉(zhuǎn)為醋酸鹽,。
3.交貨期限:30個(gè)氨基酸之內(nèi),一般2-3周,,1-2周,。
4.質(zhì)量控制:每條多肽都免費(fèi)提供合格的HPLC,MS和COA文件,。
5.售后服務(wù):1-2周內(nèi)可以提出異議,,我們免費(fèi)復(fù)測(cè),不合格免費(fèi)退貨,,1-3個(gè)月內(nèi)使用不合格可以免費(fèi)提供復(fù)測(cè),,樣品免費(fèi)保存3個(gè)月。
國(guó)肽生物根據(jù)客戶要求,,供應(yīng)各種修飾型多肽,。
1.磷酸化的Ser、Tyr和Thr修飾的多肽:我們提供單磷酸化和多磷酸化多肽服務(wù),,目前我們已經(jīng)能夠提供四個(gè)磷酸化位點(diǎn)修飾的多肽,。
2.5(6)-FAM,F(xiàn)ITC,,CY5,,RhodamineB,PNA,,EDNAS/dabcyl等熒光標(biāo)記修飾的多肽:熒光標(biāo)記修飾多肽技術(shù)是我們國(guó)肽生物的代表性多肽合成技術(shù),,我們的這項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)相當(dāng)成熟。
3.生物素Biotin,,Lys(Biotin)修飾的多肽:生物素是維生素B2的組成部分,,Biotin,Lys(Biotin)修飾的多肽也是客戶經(jīng)常定制的多肽,。我們提供生物素修飾的多肽已經(jīng)有將近100%的成功率,。
4.含有一對(duì)或多對(duì)二硫鍵修飾的多肽:二硫鍵在蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定中起到重要作用,目前我們已經(jīng)能夠?yàn)榭蛻籼峁┧膶?duì)二硫鍵修飾的多肽,。
5.含有同位素C13,,N15修飾的多肽:同位素標(biāo)記的多肽主要應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域,,通常價(jià)格較高,為了滿足客戶需要,,我們接受微克級(jí)的同位素多肽定制,。
6.含有特殊氨基酸修飾的多肽:例如,D型氨基酸,,氨基酸衍生物,,脂肪族羧酸等等,都在我們接受的定制范圍內(nèi),。
國(guó)肽生物提供150個(gè)氨基酸以內(nèi)的長(zhǎng)肽合成服務(wù),。
多肽合成過(guò)程中,肽鏈過(guò)長(zhǎng)時(shí),,經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)缺殘基,,氨基酸縮合困難等情況,基于這些現(xiàn)象,,我們開發(fā)了三種有效提高反應(yīng)成功率的方案:
1. 微波合成法:對(duì)于合成過(guò)程中出現(xiàn)的一些難以縮合的氨基酸,,我們采用微波法進(jìn)行合成,該方法*,,并且大大縮短了反應(yīng)時(shí)間,。
2. 片段合成法:當(dāng)某些多肽用常規(guī)合成方法合成困難,我們也會(huì)采用將多肽中某一段的某幾個(gè)氨基酸縮合之后作為一個(gè)整體縮合到肽鏈上去,,這種方法也能夠解決許多合成中存在的問(wèn)題,。
3.酰肼合成法:酰肼法合成多肽的方法是將固相合成的 N末端Cys 多肽和 C末端多肽酰肼之間的化學(xué)選擇性反應(yīng)形成酰胺鍵而實(shí)現(xiàn)多肽的連接,該方法根據(jù)肽鏈中Cys的位置,,將整條肽鏈分成多條序列分別合成,,終經(jīng)過(guò)液相縮合反應(yīng)得到目標(biāo)肽,顯著地提高了終產(chǎn)物純度,,廣泛適用于含有Cys的長(zhǎng)鏈多肽的合成,。
國(guó)肽生物擁有成熟的長(zhǎng)肽合成工藝,能夠根據(jù)客戶定制的多肽序列,,快速有效地設(shè)計(jì)合成方案并迅速開始合成,,更快更好的為客戶提供所需的服務(wù)是我們不變的堅(jiān)持。
國(guó)肽生物主要提供:多肽合成,、多肽定制,、同位素標(biāo)記肽、人工胰島素,、磷酸肽,、生物素標(biāo)記肽、熒光標(biāo)記肽(Cy3,、Cy5,、Fitc、AMC等),、目錄肽,、偶聯(lián)蛋白(KLH、BSA,、OVA等),、美容肽、化妝品肽,、多肽文庫(kù)構(gòu)建,、抗體服務(wù)、糖肽,、訂書肽,、藥物肽、RGD環(huán)肽等,。詳情請(qǐng)咨詢國(guó)肽生物
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