由于GFP（綠色熒光蛋白）和其他綠色發(fā)光體（例如FITC）是使用廣泛的熒光染料,，因此我們的寶藍(lán)色激發(fā)/發(fā)射裝置是體視鏡熒光適配器常用的選擇,。在黃色Longpass和綠色bandpass屏障濾波器選項之間進(jìn)行選擇時，經(jīng)常會要求我們提供建議,。本文將介紹每種方法的優(yōu)缺點。

光譜特性

• Longpass –傳輸所有大于500nm的波長
• bandpass –僅在500 – 560nm之間傳輸

實際上,，這意味著bandpass僅傳輸綠色波長，而Longpass則傳輸綠色,，黃色,，橙色和紅色。

濾光片作用

     熒光應(yīng)用中任何濾光片的目的都是為了增加您想要看到的東西（“信號”）的觀看對比度。主要工作是阻擋來自激發(fā)源的反射光并透射熒光發(fā)射,。其他潛在的干擾源（“噪聲”）是觀看區(qū)域中其他物質(zhì)的熒光,，這些物質(zhì)可以掩蓋目的信號。這可能是來自諸如生長培養(yǎng)基（與秀麗隱桿線蟲一起使用時）或?qū)ο蟊旧淼囊徊糠郑ɡ缰参镏械娜~綠素或發(fā)育中的斑馬魚卵黃）之類的背景熒光,。

Longpass濾光片和bandpass濾光片都可以很好地阻擋激發(fā)光,。

盡管您可能會認(rèn)為選擇與預(yù)期釋放量緊密匹配的濾光片會更好，但這并非總是如此,。

    如果您要消除的噪聲與信號沒有重疊,，則bandpass是一個不錯的選擇。例如,，在擬南芥或其他植物中,，葉綠素發(fā)出的紅色熒光就是這種情況，如下圖所示*,。葉綠素發(fā)出遠(yuǎn)紅色的光,，其峰值在約685 nm處。在使用Longpass濾光片制作的左側(cè)圖像中,，紅色熒光難以區(qū)分綠色GFP熒光,。綠色的bandpass濾光片消除了這種情況，使您很容易看到葉子中的GFP熒光,。

      如果噪聲與信號頻譜重疊,，則bandpass濾波器可能會引起混淆。使用Longpass濾波器,，您可以通過兩種潛在的方式將信號與噪聲區(qū)分開：強(qiáng)度和 顏色,。使用bandpass濾鏡，您可以刪除顏色（光譜）,，而僅保留強(qiáng)度,。下面的熒光轉(zhuǎn)基因斑馬魚圖像說明了這一點。這條魚**在心臟中表達(dá)GFP,，在血細(xì)胞中表達(dá)mCherry,。下圖是兩幅圖像的合成-一幅是使用Longpass濾波器拍攝的，另一幅是使用綠色bandpass濾波器拍攝的,。

通過Longpass（頂部）和bandpass濾光片拍攝的轉(zhuǎn)基因熒光斑馬魚

     在頂部圖像中,，您可以看到綠色熒光的心臟，紅色熒光的血細(xì)胞和蛋黃的天然黃色熒光,。這些很容易區(qū)分,。在下部圖像中，所有內(nèi)容均以不同的綠色強(qiáng)度顯示,。心臟明亮,，但蛋黃沒有那么暗,。說所有綠色都與GFP表達(dá)有關(guān)是不正確的。在這種情況下,，*好使用Longpass濾鏡觀看物體,。

      在某些情況下，選擇不太明顯,。秀麗隱桿線蟲的生長培養(yǎng)基具有一些背景綠色熒光,。與黃色長通相比，綠色bandpass濾鏡確實增加了一些清晰度和對比度,。在許多測試中,，我們讓數(shù)名觀察員觀察了相同的樣本。有些人喜歡長通,，因為他們認(rèn)為這實際上有助于查看背景的某些背景,，而另一些人則喜歡同一樣品的帶通。在這種情況下,，很可能還有其他選擇,，選擇并不*明顯，可能取決于個人喜好,。

如果您正在自然探索熒光,？長傳肯定是要走的路。您無法使用帶通濾鏡捕獲此草花的圖像,。

* 擬南芥  由波士頓大學(xué)的John Celenza博士提供,。

**斑馬魚由Martha Marvin博士（威廉姆斯學(xué)院）提供,，這是由Lara Hutson博士（布法羅大學(xué)）培育的轉(zhuǎn)基因品系。