上海拜力生物科技中心,，為您精心研發(fā)、細胞株產(chǎn)品,。我們就是要做一件事,，服務(wù)好廣大的科研大眾。
產(chǎn)品名稱:LLO ELISA,。

類別 :ELISA
貨期 :7-10天
LLO ELISA,。注意事項：
收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天進行檢測的標本,，儲存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集標本，將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存,。避免反復凍融,。標本2-8℃可保存48小時，-20℃可保存1個月,。-70度可保存6個月,。部分標本需添加抑肽酶。
1.  試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫,，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭,，避免交叉污染,。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品,，酶結(jié)合物或底物時,，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預(yù)孵育"時間,，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性,。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用多道移液器加樣,。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),，酶標板加上蓋或覆膜,，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作,，任何時侯都應(yīng)避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴格遵守給定的孵育時間和溫度,。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,，同時要消除板底殘留的液體和手指印,，避免影響后的讀數(shù),。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底,。標準品,、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,，并使用相應(yīng)的稀釋液配制,，不能混淆。請確配置標準品及工作液,，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差,；請勿重復使用已稀釋過的標準品,、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,，每隔10分鐘),，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),，避免反應(yīng)過強從而影響光密度讀數(shù),。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射,。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定,，以保證檢測結(jié)果的準確性。
    如標本中待測物質(zhì)含量過高,，請先稀釋后再測定,，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。
洗板方法
1.  手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體,；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),，浸泡1-2分鐘,，根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次,。
2.  自動洗板：如果有自動,，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
液體類標本：
標本必須為液體,，不含沉淀,。包括、、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等,。1ml的全血可得到0.5ml的或。每個標本量收集體積＝100ul×檢測種類,。
◇      ：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清,。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
◇      ：
應(yīng)根據(jù)的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。
◇      尿液,、胸腹水、腦脊液：
用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
◇      細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,。檢測細胞內(nèi)的成份時,，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
◇      組織標本：
切割標本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶),。用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清置于-20度或- 70度保存,，如有必要,，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。
寄標本時需注明以下情況：
1、標本編號,；2,、所測項目；3,、是否做復孔,；4、實驗后標本是否寄回

LLO ELISA 安全性
1）避免直接接觸終止液和底物A,、B,。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗,。
2）實驗中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品。
3）不要用嘴吸取里的任何成份,。

LLO ELISA 操作注意事項
1）試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,，不可保存,。
2）實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質(zhì),。
3）不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
4）使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A,、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻里的各種成份及樣品,。
6）洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
7）底物A應(yīng)揮發(fā),，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
8）加入試劑的順序應(yīng)一致,，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
9）按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作,。

LLO ELISA 樣品收集、處理及保存方法
1）-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)的試管,。收集血液后，1000×g離心10分鐘將和紅細胞迅速小心地分離,。
2）-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3）細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,，取上清液
5）保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

LLO ELISA 試劑的準備
1）標準品：標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備，不能儲存,。稀釋前將標準品振蕩混勻,。
2）洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

LLO ELISA 操作步驟
1）使用前，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2）根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復孔的盡量做復孔,。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3）加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標記的。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時。
4）甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復此操作3次。如果用洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。
6）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
7）每孔加入底物A,、B各50ul，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
8）取出酶標板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。
9）在450nm波長處測定各孔的OD值。
一些好評
辦事效率蠻高,，幾天,，就幫我搞定了這個，謝謝,！盒子蠻不錯,，包含所需試劑，并提供了中英文雙版說明書及增值稅,，很,，銷售人員的態(tài)度也謙和。靈敏度不錯,，重復性也行,，在我做的這些實驗中，與國內(nèi)同行的盒子相比來說,，性價比挺高的,，尤其是價格占有不錯的優(yōu)勢，贊一個,！操作挺方便的,，也簡單，當然,，這也多虧了公司的技術(shù)人員詳細的實驗指導,，很好，謝謝,，實驗也相當成功,。實驗出來的標準曲線很不錯（很優(yōu)美），而且價格相對合理,，技術(shù)指導很到位......我購買了兩盒,，批次新，保質(zhì)期內(nèi),，實驗結(jié)果做出來了,，貨到的挺快，那么遠,，幾天就到了,，加上我做實驗，一共五天就搞定了,。經(jīng)朋友介紹,，購買了此公司的ELISA，用過,，還不錯,，實驗效果很好，基本達到實驗參數(shù)要求,，如果,，下次還做實驗的話，我還買這家的,，朋友這幾年都在用這家的（長期訂貨）,。
LLO ELISA 局限
6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果,。
LLO ELISA 性能
1. 靈敏度：小的檢測濃度小于1號標準品,。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應(yīng),。
3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%,。

LLO ELISA  結(jié)果判斷與分析
1,、儀器值：于波長450nm的上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標（Y）,，相應(yīng)的待測物質(zhì)標準品濃度為橫坐標（X）,，做得相應(yīng)的曲線，樣品的待測物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度,。

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