1 高效液相色譜儀系統(tǒng) 
　液相色譜儀主要由貯液瓶,、泵,、進(jìn)樣器、柱子,、柱溫箱,、檢測器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成,。對于整個(gè)系統(tǒng)而言,，柱子、泵和檢測器是核心部件同時(shí)也是易出問題的主要部位,。 
2 常見問題及解決方法 
　高效液相作為一種高精密儀器,，如果在使用過程中不按照正確操作的話，就容易導(dǎo)致一些問題,。其中常見的就是柱壓問題,、漂移問題,、峰型異常問題。 
1.柱壓問題 柱壓問題是使用高效液相色譜過程中需要密切注意的地方,，柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞,、柱效、分離效果及保留時(shí)間等密切相關(guān),。所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個(gè)恒定值而是指壓力波動(dòng)范圍在50PSI（3.3 Bar）之間（在使用梯度洗脫時(shí),，柱壓平穩(wěn)緩慢的變化是允許的）。壓力過高,、過低都屬于柱壓問題,。 

　 壓力過高：這是高效液相在使用中常見的問題，指的是壓力突然升高,，一般都是由于流路中有堵塞的原因,。此時(shí)，我們應(yīng)該分段進(jìn)行檢查,。 

(1) .首先斷開真空泵的入口處,，此時(shí)PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶,，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下,，則是溶劑過濾頭堵塞,。處理方法：用30%的硝酸浸泡半個(gè)小時(shí)，在用超純水沖洗干凈,。如果液體自由滴下,，溶劑過濾頭正常，在檢查,； 
(2).打開Purge閥,，使流動(dòng)相不經(jīng)過柱子，如果壓力沒有明顯下降,，則是過濾白頭堵塞,。處理方法：將過濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個(gè)小時(shí),。如果壓力降至100PSI (6.7 Bar)以下,，過濾白頭正常，在檢查,； 
(3).把色譜柱出口端取下,，如果壓力不下降，則是柱子堵塞,。處理方法：如果是緩沖鹽堵塞,，則用95%的水沖至壓力正常,。如果是一些強(qiáng)保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞，則要用比現(xiàn)在流動(dòng)相更強(qiáng)的流動(dòng)相沖至壓力正常,。假如按上面的方法長時(shí)間沖洗壓力都不下降,，則可考慮將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用流動(dòng)相沖洗柱子,。這時(shí),，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板,，但一旦操作不甚,，很容易造成柱效下降，所以盡量少用,。  
   壓力過低：壓力過低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏,，處理方法：尋找各個(gè)接口處，特別是色譜柱兩端的接口,，把泄漏的地方旋緊即可,。當(dāng)然還有一個(gè)原因就是泵里進(jìn)了空氣，但此時(shí)表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn),，忽高忽低,，更嚴(yán)重一點(diǎn)會(huì)導(dǎo)致泵無法吸上液體。處理方法：打開Purge閥,，用3~5ml/min的流速?zèng)_洗,，如果不行，則要用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出,。 
2.漂移問題 主要包括基線漂移和保留時(shí)間漂移,。 
 2.2.1基線漂移一般說來，機(jī)器剛起動(dòng)時(shí),，基線容易漂移,，大概要半個(gè)小時(shí)的平衡時(shí)間，如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽,，還有就是在低波長下（220nm）平衡時(shí)間相對會(huì)比較長,，但如果你在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移，則你要考慮下面的原因： 

1,、柱溫波動(dòng),。解決方法：控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱,。  　

2,、流通池被污染或有氣體。 解決方法：用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池（hao斷開柱子）,。如有需要,，可以用1N的硝酸（不要用鹽酸）,。 

3、紫外燈能量不足,。解決方法：更換新的紫外燈 
4,、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成,。解決方法：檢查流動(dòng)相的組成,，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑。 

5,、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)（高K’值）以饅頭峰樣被洗脫出,，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。解決方法：使用保護(hù)柱,，如有必要,，在進(jìn)樣之間。在分析過程中,，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子,。 
6、檢測器沒有設(shè)定在大吸收波長處,。解決方法：將波長調(diào)整至大吸收波長處 
7,、流動(dòng)相的PH值沒有調(diào)節(jié)好。解決方法：加適量的酸或堿調(diào)至haoPH值 
二,、.

保留時(shí)間漂移保留時(shí)間重現(xiàn)是液相性能好壞的一個(gè)重要標(biāo)志,，同一種東西，兩次的保留時(shí)間相差不要超過15s,，超過了半分鐘可看做保留時(shí)間漂移，就無法進(jìn)行定性,，你要考慮以下原因： 
1,、溫控不當(dāng)。解決方法：調(diào)好柱溫,，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱,。 
2、流動(dòng)相比例變化,。解決方法：檢查四元泵的比例閥是否有故障 
3,、色譜柱沒有平衡。解決方法：在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱 
4,、流速變化,。解決方法：重新設(shè)定流速 
5、泵中有氣泡,。解決方法：,、從泵中除去氣泡 
  2.3 峰型異常問題 峰型問題是液相的主要問題,，在做液相過程中，我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰型,，對于各種各樣的異常峰,，要區(qū)別對待，從主要問題出發(fā),，一個(gè)一個(gè)加以解決,。  
1、色譜圖中未出峰,。解決方法：系統(tǒng)未進(jìn)樣或樣品分解,；泵未輸液或流動(dòng)相使用不正確；檢測器設(shè)置不正確,；針對以上情況成因作相應(yīng)調(diào)整即可,。 
2、 一個(gè)峰或幾個(gè)峰是負(fù)峰,。解決方法：流動(dòng)相吸收本底高,；進(jìn)樣過程中進(jìn)入空氣；樣品組分的吸收低于流動(dòng)相,。 
3,、 所有峰均為負(fù)峰。解決方法：信號電纜接反或檢測器輸出極性設(shè)置顛倒,；光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡,。 
4、所有峰均為寬峰,。解決方法：系統(tǒng)未達(dá)到平衡,；溶解樣品的溶劑極性比流動(dòng)相差很多；色譜柱尺寸及類型選擇不正確,；色譜柱或保護(hù)柱被污染或柱效降低,；溫度變化造成的影響。 ,、 
5,、所出峰比預(yù)想的小。解決方法：樣品黏度過大,；進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差,；檢測器設(shè)置不正確．定量環(huán)體積不正確；檢測池污染,；檢測器燈出現(xiàn)問題,。 
6、出現(xiàn)雙峰或肩峰。解決方法：進(jìn)樣量過大,；樣品濃度過高,；保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞；保護(hù)拄或色譜柱污染或失效,；柱塌陷或形成短通道,。 
7、前伸峰,。解決方法：進(jìn)樣量或樣品濃度高,；溶解樣品的溶劑較流動(dòng)相極性強(qiáng)；保護(hù)柱或色譜柱污染或失效,。 
8,、拖尾峰。解決方法：柱超載,，降低樣品量,；增加柱直徑采用較高容量的固定相；峰干擾,，對樣品進(jìn)行清潔過濾,；調(diào)整流動(dòng)相；硅羥基作用,，加入三乙胺,，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相pH值；柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效,，更換燒結(jié)不銹鋼,；加在線過濾器，對樣品進(jìn)行過濾,；死體積或柱外體積過大,，將連接點(diǎn)降至低；盡可能使用內(nèi)徑較細(xì)的連接管,；柱效下降,，更換柱子；采用保護(hù)柱,，對柱子進(jìn)行再生。 
9,、出現(xiàn)平頭峰,。解決方法：檢測器設(shè)置不正確；進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高,。 
10,、出現(xiàn)鬼峰。解決方法：進(jìn)樣閥殘余峰,，在每次進(jìn)完樣后用充足的時(shí)間來平衡和清洗系統(tǒng),；樣品中存在未知物,，改進(jìn)樣品的預(yù)處理；流動(dòng)相污染,，更換新流動(dòng)相,，盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用，隔夜的流動(dòng)相再次使用時(shí)要過濾,；盡可能使用HPLC級試劑,；流路中有小的氣泡，打開Purge閥,，加大流速排除,。 

3 結(jié)語 

以上內(nèi)容只是對液相色譜中出現(xiàn)的常見的問題進(jìn)行了分析，在故障排除時(shí)要遵守以下原則：一次只改變一個(gè)因素,，確定假定因素與問題之間的聯(lián)系,；如果通過更換組件來排查故障時(shí)要注意將拆下的完好組件裝回原位，避免浪費(fèi),；這是成功進(jìn)行故障排除的關(guān)鍵,。總之,，在使用高效液相色譜時(shí)一定要注意樣品的前處理與儀器的正確操作和保養(yǎng),。