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人膽管癌細(xì)胞(QBC-939)

來(lái)源:上海研謹(jǐn)生物科技有限公司   2020年06月22日 12:06  

                          膽管癌細(xì)胞(QBC-939)

 

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞由第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院建系于1997年,,細(xì)胞來(lái)源于一位接受了肝膽手術(shù)的肝外膽管癌患者,。

 

細(xì)胞特性

1) 來(lái)源:肝外膽管腫瘤

2) 形態(tài)上皮細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)

3) 含量:>1x106 個(gè)/mL

4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5) 規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

 

運(yùn)輸和保存:使用T25瓶充液發(fā)送活細(xì)胞。收到細(xì)胞后,,請(qǐng)先在顯微鏡下檢查細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),并將T25瓶置于培養(yǎng)箱約6h或過(guò)夜后,,再次檢查細(xì)胞狀態(tài),。若狀態(tài)良好,可按照以下細(xì)胞培養(yǎng)步驟進(jìn)行細(xì)胞后續(xù)處理操作,。若發(fā)現(xiàn)可疑污染物,,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系,。

 

細(xì)胞用途:僅供科研使用。

                       

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備RPMI-1640養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,。或準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基(GIBCO,,貨號(hào)11995-065),90%,;胎牛血清,,10%;雙抗,,1%,。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3) 凍存液90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)液氮儲(chǔ)存,。

二. 細(xì)胞處理

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或將細(xì)胞懸液加入10cm皿中,,加入8ml培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,可進(jìn)行傳代培養(yǎng)

對(duì)于貼壁細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2,。

2. 加2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺(tái),,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中

3)細(xì)胞凍存:細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),,進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,,細(xì)胞變圓脫落后,,加入約1ml血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO進(jìn)行凍存,。

 

注意事項(xiàng):

1. 收到細(xì)胞后,,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染,,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系

2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為潛在的生物危害性,,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

CCK8檢測(cè)

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

 

免疫組化

熒光定量PCR

動(dòng)物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測(cè)

細(xì)胞增殖

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞劃痕

鈣離子濃度檢測(cè)

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

microRNA 測(cè)序

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

Taqman探針

ATP/ADP檢測(cè)

 

石蠟/冰凍切片

定點(diǎn)突變

線粒體膜電位(MMP)檢測(cè)

細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

免疫共沉淀

真核表達(dá)載體構(gòu)建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標(biāo)定量(Label-free)實(shí)驗(yàn)

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