細胞是生命結(jié)構(gòu)與功能的基本單位,,在對生命健康與疾病研究的探索中,,常需以細胞研究為基礎(chǔ),,而細胞之間的差異,,使得在對群體細胞的研究中,,不可避免的會掩蓋了許多個體細胞的*信息,,為了更全面的探索生命,更好的服務(wù)人類健康,,單細胞分析愈發(fā)受到重視,,其難點在于對單個細胞的捕獲、刺激以及檢測分析等,,而液滴微流控技術(shù),,因其具有流體操作簡便、高單分散性,、小型化,、低成本、高靈敏度,、高通量等優(yōu)點,,迸發(fā)出鮮活的生命力,已成為單細胞操控與分析的有力工具,。
案例一:高通量篩選
Thomas[1]等人研發(fā)的單細胞高通量篩選系統(tǒng),,通過將單個酵母細胞包裹在20pl的微滴中,在微滴中對酵母細胞孵育并使其分泌出一種酶,,接著在微流控芯片對每個液滴注入熒光底物,,后,使用熒光檢測模塊以300滴每秒的頻率對液滴進行分選,。其操作流程可見下圖,。
案例二:高通量計數(shù)
Heng[2]等人基于液滴微流控,研究了一種簡單而精確的細胞計數(shù)方法,,實現(xiàn)了大量人體細胞與細菌的計數(shù),,證實在液滴中的細菌和人體細胞分布與預(yù)期的泊松分布高度一致,并通過大量的統(tǒng)計數(shù)據(jù),,進一步評估了液滴中人類細胞的細胞活性,。
上圖中,,a為人類細胞計數(shù)的明場圖像,b為HL60 細胞的熒光圖像,,c和d分別為每滴微滴中計數(shù)HL60細胞和H1975細胞的計數(shù)分布圖,。
常見液滴單細胞應(yīng)用
1.單細胞基因組或轉(zhuǎn)錄組分析:檢測所需分子量更小。
2.組織分析:研究細胞間異質(zhì)性,。
3.譜系示蹤:進行基因組與生化分析,,比傳統(tǒng)FACS分選技術(shù)更加靈活。
4.細胞分選:與流式細胞儀相比,,所需細胞數(shù)量更少,,更適合稀有樣品的計數(shù)。
5.體化醫(yī)療:對腫瘤單細胞的異質(zhì)性分析,,以進行癌癥免疫治療,。
參考文獻:
[1].Thomas, Stéphane, Andrew D, et al. Droplet-based microfluidic high-throughput screening of heterologous enzymes secreted by the yeast Yarrowia lipolytica[J]. Microbial Cell Factories, 2017, 16(1):18.
[2].Heng, Ouriel, Jeremy, et al. High throughput single cell counting in droplet-based microfluidics[J]. Scientific Reports, 2017, 7(1):1366.
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