關(guān)鍵詞：熒光定量PCR儀,、數(shù)字PCR儀,、微量分光光度計

定量PCR還是數(shù)字PCR

隨著數(shù)字PCR技術(shù)應(yīng)用的展開,，越來越多實驗室被其定量的方式,、結(jié)果的高靈敏度,、高重復性等特質(zhì)所吸引,。2012年年底,，由Frost & Sullivan公司在北美市場進行的調(diào)研顯示,，約三分之一的被訪者表示會考慮購買數(shù)字PCR設(shè)備,。

那么，是否意味著目前在研究,、臨床和工業(yè)領(lǐng)域內(nèi),，廣泛采用的熒光定量PCR技術(shù)將被淘汰？數(shù)字PCR很快就要將其*取代,？越來越多實驗室對陳斯卡提出類似問題,。結(jié)合多年推廣定量PCR與近幾年投身數(shù)字PCR領(lǐng)域的經(jīng)驗心得，陳斯卡談?wù)勛约旱捏w會,，供大家參考,。

陳斯卡總體的觀點是：雖然絕大多數(shù)定量PCR的應(yīng)用都可以使用數(shù)字PCR完成，但在可預(yù)期的將來,，兩者將長期共存,。到底使用定量PCR還是數(shù)字PCR，取決于具體應(yīng)用和對數(shù)據(jù)的要求,。兩者不是either/or的關(guān)系,，而是both/and的關(guān)系。兩種技術(shù)平臺各自的特點與現(xiàn)狀大致可從下面8個方面說明。

1.   在20多年的使用和發(fā)展中,，定量PCR作為一種技術(shù)平臺,，已經(jīng)產(chǎn)出海量的數(shù)據(jù)，在工業(yè)界和分子檢測的某些應(yīng)用上,，定量PCR已經(jīng)成為“金標準”,。基礎(chǔ)研究方面,，則形成了被稱為MIQE的“定量PCR標準實驗指南”,。

2.   在定量PCR的各種應(yīng)用中，基因表達分析（gene expression analysis）的應(yīng)用比重約占七成,，綜合各種因素來看,，眼下定量PCR還是進行基因表達研究的理想手段。

3.   上述的“各種因素”具體展開,，主要包括：通量,、自動化程度、各種檢測探針與染料,、檢測通道,、成本和可參考文獻與protocol的數(shù)目等等。

4.   就目前市場上已有的數(shù)字PCR設(shè)備來看,，定量PCR在檢測的線性范圍上具有優(yōu)勢,，意味著同一個run內(nèi)可對各種表達豐度的樣品進行分析。

5.   目前定量PCR已經(jīng)能實現(xiàn)高通量樣品條件下的自動化操作,。

6.   數(shù)字PCR在單分子層面上的定量,，可以*擺脫對標準曲線的依賴而直接給出靶序列的拷貝數(shù)，提高了實驗結(jié)果在批內(nèi)和批間的穩(wěn)定性,，甚至能用來對標準品進行定標,。

7.   基于定量的方式，數(shù)字PCR結(jié)果的高重復性和高精度可實現(xiàn)微小差異的基因表達分析,，如等位基因的不平衡表達,、單細胞基因表達分析、microRNA表達分析等等,。所謂“微小差異”的標準一般而言是指表達水平的差異在2倍以內(nèi),。

8.   同等條件下，數(shù)字PCR在靈敏度方面擁有優(yōu)勢,，使得該技術(shù)已成為腫瘤的液態(tài)活檢,、病原微生物檢測、轉(zhuǎn)基因成分測定,、宿主殘留DNA分析等的熱門技術(shù),。