一,、上機(jī)生化實(shí)驗(yàn)?zāi)康募霸?/strong>

　　1.肝功能八項(xiàng)：肝功能檢查的目的在于探測(cè)肝臟有無(wú)疾病,、肝臟損害程度以及查明肝病原因,、判斷預(yù)后和鑒別發(fā)生黃疸的病因等

　　谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)：L-丙氨酸+α-酮戊二酸  ALT > BT酸+L-谷氨酸

　　　　　　　　　　　　　BT酸+NADH+H+  LDH > 乳酸+NAD+

　　　　　　　　　　　　　在340nm波長(zhǎng)測(cè)定NADH每分鐘吸光度的變化率(△A/分鐘)，計(jì)算其活性(速率法)

　　谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST/GOT)：L-天冬門(mén)氨酸+α-酮戊二酸  AST > 草酰乙酸+谷氨酸

　　　　　　　　　　　　　草酰乙酸+NADH  MDH > 乳酸+NAD+

　　　　　　　　　　　　　在340nm波長(zhǎng)測(cè)定NADH每分鐘吸光度的變化率(△A/分鐘),，計(jì)算其活性(速率法)

　　γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶(GGT)：γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺+雙甘氨肽  r-G > γ-谷氨酰雙甘氨肽+5-氨基-2-硝基甲苯酸，在405nm波長(zhǎng)測(cè)定每分鐘吸光度的變化率△A/分鐘),，計(jì)算其活性(速率法)

　　總膽紅素(T-BIL)：在PH3左右有表面活性劑和加速劑的條件下,，樣品中的總膽紅素被氧化劑釩酸鈉氧化為膽綠素。膽紅素的黃色特異性吸光度下降,，通過(guò)測(cè)定釩酸鹽氧化前后吸光度的變化,，計(jì)算出樣品中總膽紅素的含量。(兩點(diǎn)終點(diǎn)法)

　　直接膽紅素(D-BIL)：在PH3左右有表面活性劑和加速劑的條件下,，樣品中的直接膽紅素被氧化劑釩酸鈉氧化為膽綠素,。膽紅素的黃色特異性吸光度下降，通過(guò)測(cè)定釩酸鹽氧化前后吸光度的變化,，計(jì)算出樣品中直接膽紅素的含量。(兩點(diǎn)終點(diǎn)法)

　　堿性磷酸酶(ALP)：血清中的堿性磷酸酶在堿性條件下作用于對(duì)硝基苯磷酸鈉,，生成對(duì)-硝基酚和磷酸鹽,，在405nm波長(zhǎng)測(cè)定每分鐘吸光度的變化率(△A/分鐘)，計(jì)算其活性(速率法)

　　白蛋白(ALB)：在PH4.20左右的條件下,，白蛋白分子上的正電荷魚(yú)溴甲酚綠上的陰離子集團(tuán)結(jié)合形成綠色的復(fù)合物,，在630nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度,，計(jì)算其含量。(終點(diǎn)法)

　　總膽汁酸(TBA)：膽汁酸+S-NAD  3α-HSD > 3-酮類(lèi)固醇+S-NADH

　　　　　　　　　　3-酮類(lèi)固醇+S-NAGH  3α-HSD > 膽汁酸+NAD,，

　　　　　　　　　　不斷完成循環(huán)反應(yīng),，在405nm波長(zhǎng)測(cè)定每分鐘S-NADH吸光度的變化率(△A/分鐘)，計(jì)算其活性(兩點(diǎn)速率法)

　　2.腎功能三項(xiàng)：反映腎分泌寄代謝功能

　　尿素/尿素氮(UREA/BUN)：尿素+H2O+2H+  尿素酶 > 2NH4+ +CO2

　　　　　　　　　　　　　　　2NH4+ + α-酮戊二酸+NADH+  GLDH > 谷氨酸+NAD+ +H2O

　　　　　　　　　　　　　　　在340nm波長(zhǎng)測(cè)定NADH每分鐘吸光度的變化率(△A/分鐘),，計(jì)算其含量(兩點(diǎn)速率法)

　　尿酸(UA)：尿素+H2O+O2  UAO > 尿囊素 +CO2+H2O2

　　　　　　　H2O2 + 4-AAP+DHBS  POD > 醌亞胺 +H2O

　　　　　　　在510nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值,，計(jì)算其含量(終點(diǎn)法)

　　肌酐(CREA)：肌酐+H2O  肌酐酶 > 肌酸　　肌酸+H2O  肌酐酶 > 肌氨酸+脲

　　　　　　　　肌氨酸 + H2O +O2  肌氨酸氧化酶 > 甘氨酸+HCHO + H2O2

　　　　　　　　2H2O2 + 4-AAP+TOOS  過(guò)氧化物酶 > 紅色醌型化合物 +4H2O

　　　　　　　　在546nm波長(zhǎng)測(cè)定紅色醌型化合物的吸光度值，計(jì)算其含量,。(兩點(diǎn)終點(diǎn)法)

　　3.血脂四項(xiàng)：反映血液脂質(zhì)含量

　　總膽固醇(TC)：血清中的脂化膽固醇經(jīng)膽固醇脂酶水解產(chǎn)生游離膽固醇,，與原有的游離膽固醇一同被膽固醇氧化酶氧化生成膽甾烯酮和過(guò)氧化氫，過(guò)氧化氫酶使過(guò)氧化氫分解出氧的游離基,，它同4-氨基安替比林和酚生成紅色醌型化合物,，在510nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值，計(jì)算其含量,。(終點(diǎn)法)

　　甘油三酯(TG)：甘油三酯+H2O  脂肪酶 > 甘油+脂肪酸

　　　　　　　　　甘油 + ATP  甘油激酶 > 甘油-3-磷酸+ADP

　　　　　　　　　甘油-3-磷酸+O2  3-磷酸甘油氧化酶 > H2O2+磷酸羥基BT

　　　　　　　　　H2O2 +4-氨基安替比林+對(duì)氯酚  過(guò)氧化物酶 > 紅色醌型化合物

　　　　　　　　　在510nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值,，計(jì)算其含量。(終點(diǎn)法)

　　高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)：通過(guò)加入低密度脂蛋白膽固醇的抑制劑,，將低密度和極低密度部分隱藏起來(lái),，直接測(cè)定高密度部分的膽固醇含量。顯色反應(yīng)原理同總膽固醇,，在510nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光值,，計(jì)算其含量。(終點(diǎn)法)

　　低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)：低密度脂蛋白包括極低密度脂蛋白,，能與磷鎢酸鎂和聚乙二醇復(fù)合劑作用產(chǎn)生沉淀,，用分散劑可使沉淀顆粒細(xì)小均一，在620或630nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值,，計(jì)算其含量,。(終點(diǎn)法)

　　4.血糖：反映血液糖類(lèi)含量

　　葡萄糖(Glu)：血清中的葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下，生成過(guò)氧化氫,，用過(guò)氧化物酶將過(guò)氧化氫分解出氧的游離基,，它將4-氨基安替比林和酚氧化為紅色的醌型化合物，在510nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值,，計(jì)算其含量,。(終點(diǎn)法)

　　糖化血清蛋白/果糖胺(GSP)：GSP上的酮胺結(jié)構(gòu)使氯化硝基氮唑藍(lán)(NBT)還原成紫色的甲臜，在546nm波長(zhǎng)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)和樣品的吸光度變化率(△A/分鐘),，計(jì)算其含量,。(兩點(diǎn)速率法)

　　5.心肌酶譜：反映心肌損傷

　　肌酸激酶(CK)：磷酸激酶+ADP  CK > 肌酸+ATP+H+

　　　　　　　　　葡萄糖 + ATP  HK > 葡萄糖-6-磷酸+ADP+H+

　　　　　　　　　葡萄糖-6-磷酸+NADP+  G6PDH > 6-磷酸-葡萄糖酸+NADPH+H+

　　　　　　　　　在340nm波長(zhǎng)測(cè)定NADPH每分鐘吸光度的變化率(△A/分鐘)，計(jì)算其活性,。(速率法)

　　肌酸激酶同工酶(CKMB)：用特異抗CK-M抗體將CK-M抑制,，測(cè)定CK-B的活性,，其中包含50%CK-MB的活性，將測(cè)定結(jié)果乘以2即為CK-MB的活性,。

　　　　　　　　　　　　　　磷酸肌酸+ADP  CK-B > 肌酸+ATP+H+

　　　　　　　　　　　　　　葡萄糖 + ATP  HK > 葡萄糖-6-磷酸+ADP+H+

　　　　　　　　　　　　　　葡萄糖-6-磷酸+NADP+  G6PDH > 6-磷酸-葡萄糖酸+NADPH+H+

　　　　　　　　　　　　　　在340nm波長(zhǎng)測(cè)定NADPH每分鐘吸光度的變化率(△A/分鐘),，計(jì)算其活性。(速率法)

　　乳酸脫氫酶(LDH-L)：L-乳酸+NAD+  LDH-L > BT酸+NADH

　　　　　　　　　　　　在340nm波長(zhǎng)測(cè)定每分鐘NADH吸光度的變化率(△A/分鐘),，計(jì)算其活性,。(速率法)

　　乳酸脫氫酶同工酶(LDH-1)：L-乳酸+NAD+  LDH1 > BT酸+NADH+H+

　　　　　　　　　　　　　　　在硫氰酸胍抑制劑存在的條件下抑制了LDH2-5，在340nm波長(zhǎng)測(cè)定每分鐘NADH吸光度的變化率(△A/分鐘),，計(jì)算其活性,。(速率法)

　　6.無(wú)機(jī)離子：維持體內(nèi)的電解質(zhì)、酸堿平衡和滲透壓平衡,。

　　鈣(Ca)：在堿性條件下,，鈣離子與鄰甲酚酞絡(luò)合酮(OCPC)形成紫紅色復(fù)合物，用8-羥基喹啉消除鎂離子的干擾,，在578nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值,，計(jì)算其含量。(終點(diǎn)法)

　　氯(Cl)：2Cl- +Hg(SCN)2        > HgCl2+2SCN-

　　　　　　2SCN- + Fe3+         > Fe(SCN)3

　　　　　　在510nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值,，計(jì)算其含量,。(終點(diǎn)法)

　　無(wú)機(jī)磷(IP)：在酸性條件下，樣本中的無(wú)機(jī)磷與鉬酸銨反應(yīng)生成非還原性磷鉬酸化合物,，

　　在340nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值,，計(jì)算其含量。(終點(diǎn)法)

　　鎂(Mg)：在堿性條件下,，鎂離子與染料Calmagite結(jié)合,，生成紫紅色復(fù)合物，在546nm

　　波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值,，計(jì)算其含量,。(終點(diǎn)法)

　　鐵(Fe)：血清中的三價(jià)鐵被還原劑還原為二價(jià)鐵，二價(jià)鐵同菲啰嗪形成紫色的化合物,，在578nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值,，計(jì)算其含量。(終點(diǎn)法)

　　鋅(Zn)：血清中的鋅離子與鋅試劑形成藍(lán)色化合物,，由于顯色劑本身為紅色,，在低含量水平范圍呈紫色，除干擾劑將樣本中的銅離子,、鐵離子隱蔽起來(lái),，在630nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值，計(jì)算其含量。(終點(diǎn)法)

　　鈉(Na)：鄰硝基酚-β-D-半乳糖苷在鈉依賴(lài)性β-D-半乳糖苷酶催化下生成鄰-硝基酚和半乳糖,，鄰-硝基酚的生成量和樣品中鈉離子的濃度呈正比。鄰-硝基酚在堿性環(huán)境中呈黃色,，可在405nm波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度的升高速度,，計(jì)算鈉離子的濃度。(兩點(diǎn)速率法)

　　鉀(K)：血清中的鉀離子在蛋白水解酶的作用下,，從蛋白分子的吸附下解脫出來(lái)與四苯硼鋰呈濁度反應(yīng),，在620nm或630nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值，計(jì)算其含量,。(終點(diǎn)法)

　　7.總蛋白(TP)：樣本中蛋白質(zhì)分子的肽鍵與雙縮脲試劑中的銅結(jié)合形成紫色化合物,，在546nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值，計(jì)算其含量,。(終點(diǎn)法)

　　8.α淀粉酶(AMS)：Gal-G2-CNP  a-AMY > Gal-G2+CNP

　　　　　　　　　　　在405nm波長(zhǎng)測(cè)定每分鐘CNP吸光度的變化率(△A/分鐘),，計(jì)算其活性。(速率法)

　　二,、尿常規(guī)相關(guān)

　　A,、尿常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目及意義

　　1、檢測(cè)項(xiàng)目：對(duì)尿液中的白細(xì)胞(WBC),、酮體(KET),、亞硝酸鹽(NIT)、尿膽原(URO),、膽紅素(BIL),、蛋白質(zhì)(PRO)、葡萄糖(GLU),、尿比重(SG),、酸堿度(PH)、隱血(BLD),、肌酐(CR),、尿鈣(Ca)、微白蛋白(MA)十三項(xiàng)化學(xué)指標(biāo)進(jìn)行半定量或定性檢測(cè),，為診斷和科研提供參考,，適用于篩選試驗(yàn)或輔助診斷。

　　2,、采用干化學(xué)法,，配套尿液分析儀對(duì)尿液中各項(xiàng)待測(cè)成分進(jìn)行檢測(cè)，尿液中的各項(xiàng)待測(cè)成分可使尿試紙條上相應(yīng)的試劑塊發(fā)生顏色變化,，反應(yīng)顏色的深淺與尿液中相應(yīng)待測(cè)成分濃度成一定比例關(guān)系,。通過(guò)此方法對(duì)泌尿系統(tǒng)疾病、肝膽疾病、糖尿病等疾病進(jìn)行輔助診斷與療效觀察,，尿干化學(xué)檢測(cè)僅作為篩選試驗(yàn),，并且不能以此作為單一的診斷方法。

　　B,、檢測(cè)原理

　　1,、空白塊(校正塊)：尿在測(cè)試塊上分布的狀態(tài)及尿本身的顏色一般都會(huì)給測(cè)定結(jié)果帶來(lái)誤差，設(shè)空白塊就是為了排除這些產(chǎn)生誤差的因素,，各項(xiàng)目都使用同一空白塊,。

　　2、白細(xì)胞：根據(jù)酯酶法的原理,，粒細(xì)胞漿內(nèi)還有酯酶,，這種酶能水解一種3-羥基吲哚酚酯類(lèi)底物，釋放出酚從而與重氮試劑反應(yīng)生成紫紅色化合物,。

　　3,、酮體：根據(jù)硝普酸鈉法原理，硝普酸鈉和酮體(乙酰乙酸)在堿性條件下相互作用而呈現(xiàn)紫色,，特別是乙酰乙酸對(duì)此特別靈敏,。

　　4、亞硝酸鹽：反應(yīng)依賴(lài)于尿中革蘭氏陰性細(xì)菌把硝酸鹽還原成亞硝酸鹽,，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯shen酸反應(yīng)生成重氮化合物,，重氮化合物再與萘基乙二胺二鹽酸結(jié)合呈現(xiàn)出桃紅色。

　　5,、尿膽原：根據(jù)偶氮結(jié)合法的原理,，尿膽原在強(qiáng)酸條件下和重氮鹽偶聯(lián)形成胭脂紅色素。

　　6,、膽紅素：根據(jù)偶氮偶合法的原理,，2，4-二氯苯胺重氮鹽與膽紅素進(jìn)行特異性反應(yīng),，并與膽紅素的濃度相應(yīng)產(chǎn)生不同的顏色,。

　　7、蛋白質(zhì)：根據(jù)染料結(jié)合的蛋白誤差法原理,，蛋白質(zhì)與染料結(jié)合形成復(fù)合物產(chǎn)生色變,，特別是對(duì)白蛋白的反應(yīng)比對(duì)球蛋白、血紅蛋白,、本-周氏蛋白和粘蛋白更為靈敏,。

　　8、葡萄糖：根據(jù)葡萄糖氧化酶法反應(yīng)原理,，葡萄糖氧化酶特異性氧化β-D-葡萄糖,，生成葡萄糖醛酸和過(guò)氧化氫，過(guò)氧化氫在過(guò)氧化物酶的作用下，使指示劑氧化而呈現(xiàn)出紫紅色,。

　　9,、尿比重：利用多聚電解質(zhì)方法，尿中電解質(zhì)與聚電解質(zhì)發(fā)生離子交換的原理,。陽(yáng)離子存在時(shí),，多聚物氫離子通過(guò)交換釋出，使溴百里酚藍(lán)指示劑發(fā)生顏色變化,，顏色由藍(lán)經(jīng)過(guò)藍(lán)綠后變成黃色。

　　10,、酸堿度：通過(guò)PH指示劑測(cè)定5.0-9.0的范圍內(nèi)的PH值,。

　　11、隱血：根據(jù)血紅蛋白接觸活性法原理,，通過(guò)血紅蛋白的類(lèi)過(guò)氧化物酶樣作用催化分解過(guò)氧化物,，使四甲基聯(lián)苯胺氧化呈色。

　　12,、肌酐：根據(jù)肌酐與3,5-二硝基苯甲酸反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色,，顏色深淺與肌酐的濃度成正比關(guān)系。

　　13,、尿鈣：根據(jù)鈣離子與鄰甲酚酞絡(luò)合酮反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色,，顏色深淺與鈣離子的濃度成正比關(guān)系。

　　14,、微白蛋白(微量白蛋白)：根據(jù)染料結(jié)合的蛋白誤差法原理,，微量白蛋白與染料結(jié)合形成復(fù)合物產(chǎn)生色變，對(duì)白蛋白的反應(yīng)靈敏,。

　　C,、樣本的采集與保存

　　1、留取尿液標(biāo)本一般應(yīng)盡量采用新鮮晨尿,，因?yàn)橐归g飲水較少,，腎臟排到尿液中的多種成分都儲(chǔ)存在膀胱內(nèi)并進(jìn)行濃度，易于查到,，提高陽(yáng)性檢出率,，其他隨機(jī)留取的尿液也可，但應(yīng)以留取中段尿?yàn)楹谩?/p>

　　2,、按排尿的先后測(cè)序,，可將尿液分為前段、中段,、后段,。因前段尿和后段尿容易被污染，因此，一般都留取中段尿,。

　　3,、女性留取尿標(biāo)本時(shí)應(yīng)避開(kāi)經(jīng)期，以防止陰道分泌物混入尿液中,，影響檢查結(jié)果,。

　　D、實(shí)驗(yàn)要求

　　1,、樣本要求：不要在尿樣中加入防腐劑,。尿樣不可離心，測(cè)試前將尿樣混勻,。注射或服用維生素C會(huì)使亞硝酸鹽,、膽紅素、葡萄糖,、隱血檢測(cè)結(jié)果偏低甚至出現(xiàn)假陰性,，應(yīng)用藥10小時(shí)后再進(jìn)行測(cè)定。

　　2,、環(huán)境要求：環(huán)境溫度(25±5)℃,，相對(duì)濕度≤80%，推薦zuijia測(cè)試溫度23-27℃,。

三,、凝血相關(guān)

　　1、采集靜脈血,，立即按9份血：1份抗凝劑比例與0.109mol/L枸櫞酸鈉(3.8%檸檬酸鈉)充分混合均勻,，不得有凝塊、不得形成泡沫,，并在試管上做好標(biāo)識(shí),。室溫3000rpm離心12分鐘，上層淡黃液體為待檢的乏血小板血漿,。

　　2,、血漿室溫放置，宜在2小時(shí)內(nèi)檢測(cè),。血漿若不能及時(shí)檢測(cè),，分離后-20℃可保存2周。測(cè)定前37℃快速融化,，輕微混勻后立即檢測(cè),。

　　3、對(duì)凝固,、有凝塊,、嚴(yán)重溶血,、重度黃疸、脂血,、采血量不符合要求或無(wú)標(biāo)識(shí)等不合格的標(biāo)本,，距采集時(shí)間超過(guò)2小時(shí)并且沒(méi)有按要求儲(chǔ)存的樣本，應(yīng)按照不合格標(biāo)本處理