在日本香妝品協(xié)會推薦的長期給藥(安全性)研究的劑量確定方法指南(Dose Setting Method Guideline for Human Long-Duration Trials (Safety))中進(jìn)行透皮擴(kuò)散試驗和化妝品3D表皮模型體外功效評價時,,建議以目視,、電阻抗值(electrical resistance,ER)和經(jīng)皮水分流失量( TEWL )等為指標(biāo),,進(jìn)行皮膚模型的完整性評價(integrity test),,使用合適的皮膚模型樣品對試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性非常重要。首先實驗皮膚膜需要進(jìn)行解凍及水合處理,,解凍以室溫15分鐘左右為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行,。 皮膚膜的水合處理:在擴(kuò)散池中夾入皮膚膜的狀態(tài)下,在擴(kuò)散池的一側(cè)(表皮側(cè))加入生理鹽水溶液(或者等滲磷酸緩沖液),,使其浸泡30分鐘~1小時左右,。 解凍及水合處理后剩余的水分附著在皮膚上時,用濾紙或棉棒等移去,。 為了不損傷皮膚,,整個過程請小心操作。
測量皮膚模型電阻抗的方法是將0.9%生理鹽水溶液(或等滲磷酸鹽緩沖液)加入到水合好的皮膚模型中,,在擴(kuò)散池的一側(cè)(表皮),,測量電阻抗(ER)。測定結(jié)束后,,用棉棒等仔細(xì)擦拭擴(kuò)散池和皮膚表面殘留的水分,,需要小心操作,以免損傷皮膚,。另一方面,,由于皮膚水合對TEWL值測定影響很大,為了獲得穩(wěn)定的測量值,,將皮膚固定在擴(kuò)散單元中,,在放入受體液后,在水合之前測量比較好,。在完整性測試(integrity test)中顯示異常的皮膚模型或細(xì)胞不用于后續(xù)評估測試,。
參照皮膚完整性測試數(shù)據(jù)進(jìn)行分樣,在透皮擴(kuò)散試驗和功效評估前,,應(yīng)參照測得的電阻抗值對試樣進(jìn)行分配,,這樣可以防止因皮膚模型間的偏差帶來的數(shù)據(jù)結(jié)果的差異性。
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