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大鼠胰高血糖素樣肽1(GLP-1)ELISA試劑盒說明書

來源:上海富眾生物科技發(fā)展有限公司   2011年07月18日 08:14  
大鼠胰高血糖素樣肽1(GLP-1)ELISA試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱:
通用名:大鼠胰高血糖素樣肽1(GLP-1)酶聯免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于測定大鼠血清,,血漿及相關液體樣本中胰高血糖素樣肽1(GLP-1)含量,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠胰高血糖素樣肽1(GLP-1)水平。用純化的大鼠胰高血糖素樣肽1(GLP-1)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入胰高血糖素樣肽1(GLP-1),再與HRP標記的胰高血糖素樣肽1(GLP-1)抗體結合,,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,,經過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的胰高血糖素樣肽1(GLP-1)呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠胰高血糖素樣肽1(GLP-1)濃度,。
試劑盒組成

 

1
20倍濃縮洗滌液
30ml×1瓶
7
終止液
6ml×1瓶
2
酶標試劑
6ml×1瓶
8
標準品(4.5pmol/L)
0.5ml×1瓶
3
酶標包被板
12孔×8條
9
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶
4
樣品稀釋液
6ml×1瓶
10
說明書
1份
5
顯色劑A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2張 
6
顯色劑B液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1個

 

標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
操作步驟
1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*,、第二孔中分別加標準品100μl,,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,,混勻,;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,,再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻,;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,,再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻,;混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,,再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,,濃度分別為3pmol/L,2pmol/L ,,1pmol/L,,0.5pmol/L, 0.25pmol/L),。
2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同)、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻。
3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。  
4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5.         洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,如此重復5次,,拍干,。
6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外,。
7.         溫育:操作同3。
8.         洗滌:操作同5,。
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.     測定:以空白空調零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
 
計算
  以標準物的濃度為橫坐標,,OD值為縱坐標,,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,;再乘以稀釋倍數,;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數,,即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標包被板開封后如未用完,,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,,并經常校對其準確性,,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,,如標本數量多,,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,,做復孔,。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5),。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染,。
6.底物請避光保存,。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,,以英文說明書為準,。
檢測范圍:
0.2pmol/L -4pmol/L
規(guī)格:
96人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8,。
2.有效期:6個月

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