程序控制冷凍裝置俗稱:程序降溫儀,也稱為程序冷凍儀,、胚胎冷凍儀,、細(xì)胞冷凍儀、程控降溫儀,;廣泛用于凍存細(xì)胞,、胚胎等。采用微機(jī)控制技術(shù),,軟件,,能較準(zhǔn)確地控制液氮的施放量,從而保證被凍存的生物制品以適宜的冷凍速率降溫冷凍,。該儀器具有操作簡(jiǎn)便,、人機(jī)界面清楚。
程序降溫儀是實(shí)現(xiàn)生物材料深低溫保存的關(guān)鍵設(shè)備,,根據(jù)降溫及控制原理不同,,可以將其分為兩類:①液氮噴射式降溫儀。②升降式降溫儀,。它們均以液氮為制冷源,。程序降溫儀主要由冷卻室,、低溫電磁閥,、風(fēng)扇,、溫度傳感器、放大電路,、微處理機(jī)和液氮容器組成,。
液氮噴射式降溫儀適合較大容積樣本的降溫保存,優(yōu)點(diǎn)在于控溫好,,受外界環(huán)境干擾小,,但是其價(jià)格昂貴,液氮消耗量大,,液氮中如有少量水分就會(huì)造成輸送管道堵塞和低溫電磁閥失靈,。
升降式降溫儀由液氮容器、步進(jìn)機(jī),、微機(jī)控制系統(tǒng)和記錄儀組成,。它是利用液氮的自然蒸發(fā)在杜瓦瓶頸部所形成的溫場(chǎng)(0~-196℃),由步進(jìn)機(jī)根據(jù)預(yù)先設(shè)定的降溫,、復(fù)溫程序控制生物標(biāo)本在此溫度區(qū)內(nèi)上下移動(dòng)的速率,,來控制標(biāo)本的溫度和降溫速率。
程序降溫儀步驟:
(1)冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養(yǎng)基,,使細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期,。
(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制):另取一離心管,加入培養(yǎng)基,、血清,,逐滴加入二甲基亞砜(DMSO)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,,置于室溫下待用,。
(3)離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞,用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞,,取少量細(xì)胞懸浮液(約0.1ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率,。
(4)取與細(xì)胞懸液等量的凍存液,緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液,,并晃動(dòng)試管,,制成細(xì)胞凍存懸液(DMSO后濃度為5~10%),使細(xì)胞濃度為1~5×106cells/ml,,混合均勻,,分裝于已標(biāo)示*之冷凍保存管中,1~2ml/vial,,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè),。嚴(yán)密封口后,,注明細(xì)胞名稱、代數(shù),、日期,。然后進(jìn)行凍存。
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