液相色譜柱結(jié)構(gòu)及使用

液相色譜儀由高壓液體泵,、檢測(cè)器及液相色譜柱等三部分組成,，其中液相色譜柱的正確安裝和使用,，是液相色譜工作的關(guān)鍵,；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路,。

一,、液相色譜柱的安裝：

1,、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：
a,、空柱由柱接頭,、柱管及濾片組裝而成。
    柱接頭采用低死體積結(jié)構(gòu),，柱接頭是兩端螺紋組件,，一端是為7/16英寸外螺紋，另一端是3／16英寸的內(nèi)螺紋（國(guó)內(nèi)外已規(guī)范化）,。7／16英寸外螺紋與1／4英寸柱管（Φ6.35mm）連接,，中間放置壓壞用于密封。3／16英寸的內(nèi)螺紋與1／16英寸（Φ1.57mm）的連接管連接,，中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封,。為了盡量減少柱外死體積，在安裝色譜柱時(shí),，用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底,，然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上（連接管通過壓環(huán)后露出的管長(zhǎng)度應(yīng)嚴(yán)格控制在2．5mm長(zhǎng)或其他固定尺寸）,。
    在兩端柱接頭內(nèi),，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片（或?yàn)V網(wǎng)），用于封堵柱填料不被流動(dòng)相沖出柱外而流失,?？罩鹘M件均為316#不銹鋼材質(zhì),，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對(duì)其有一定的腐蝕性,，故使用時(shí)要注意,，柱及連接管內(nèi)不能長(zhǎng)時(shí)間存留此類溶劑，以避免腐蝕,。
b,、柱填料：
    液相色譜柱的分離作用是在填料與流動(dòng)相之間進(jìn)行的，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定,。
    正相柱：多以硅膠為柱填料,。根據(jù)外型可分為無(wú)定型和球型兩種，其顆粒直徑在3—10 μm的范圍內(nèi),。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN,，-NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠。
    反相柱：主要是以硅膠為基質(zhì),，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)（ODS）的非極性填料,。也有無(wú)定型和球型之分。
    常用的其他的反相填料還有鍵合C8,、C4,、C2、苯基等,，其顆粒粒徑在3—10 μm之間,。

2、色譜柱的安裝：
a,、拆開柱包裝盒,，確認(rèn)色譜柱的類型、尺寸,、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑,。
b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用,。
c,、 按柱管上標(biāo)示的流動(dòng)相流向，將色譜柱的入口端通過連接管與進(jìn)樣閥出口相連接（如條件允許,，建議在柱前使用保護(hù)柱）,；柱的出口與檢測(cè)器連接。連接管是外徑為1.57mm,、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管,。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時(shí)一定要設(shè)法降低柱外死體積,。連接管通過空心螺釘,、壓環(huán)后盡量用力插到底,，然后順時(shí)針擰緊空心螺釘，直到擰不動(dòng)為止,，再用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1／4-1／2圈,，切記不要用力過大。如色譜柱通過流動(dòng)相加壓后有漏液現(xiàn)象,，請(qǐng)用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1／4圈,，直至不漏液為止。

二,、液相色譜柱的使用：
    色譜柱在使用前,，進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來(lái),，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品,、流動(dòng)相,、柱溫等條件的差異而有所不同；另外,，在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行（出廠測(cè)試所使用的條件是*條件）,，只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性,。

1,、樣品的前處理：
a、使用流動(dòng)相溶解樣品,。

b,、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
c,、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì),。

2、流動(dòng)相的配制：
    液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：

a,、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中（或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中）,。
b,、流動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)（特殊情況除外）,。
c,、流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果,；同時(shí)降低柱壓降,，延長(zhǎng)液體泵的使用壽命（可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度）,。
d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng),。如使用UV檢測(cè)器,，使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。
e,、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低,，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行,。
f,、在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣,。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè),，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

3,、流動(dòng)相流速的選擇：
    因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù),，使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱,，要追求*柱效,，使用*流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,，流速一般選擇1ml／min,，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳,。
    當(dāng)選用*流速時(shí),，分析時(shí)間可能延長(zhǎng)?？刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間（如使用反相柱時(shí),，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量）。

注意：
a．由于甲醇廉價(jià),，對(duì)于反相柱推薦使用甲醇體系（必須使用乙腈的場(chǎng)合除外）,。
b．對(duì)于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作流動(dòng)相，沒有提純的己烷不得使用,。用水使用超純水（電阻率大于18兆歐）,，去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì)，有可能影響分析結(jié)果,。
c．含水流動(dòng)相zui*在實(shí)驗(yàn)前配制,，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動(dòng)相不要過夜。加入*,，防止細(xì)菌生長(zhǎng),。
d．流動(dòng)相要求使用0.45 μm濾膜過濾,，除去微粒雜質(zhì)。
e．使用HPLC級(jí)溶劑配制流動(dòng)相,，使用合適的流動(dòng)相可延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命,，提高柱性能。

蘇州市萊頓科學(xué)儀器有限公司

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