血清脂蛋白的快速離心分離法

來源：上海天放實(shí)驗(yàn)儀器有限公司 2011年06月30日 16:32

血清脂蛋白的快速離心分離法

YU.2003.7

利用不同容量的角式轉(zhuǎn)頭及很容易配制的梯度液,，在各種型號的超速離心機(jī)上都能得到滿意的分離結(jié)果,。下面舉了幾個(gè)分離實(shí)例,，實(shí)際上還可以應(yīng)用于各種型號各種容量的固定角式轉(zhuǎn)頭,。

（一）梯度液

A液：11.40gNacl,，0.1g EDTA-Na2,，置于1000ml量筒中加入500ml重蒸水及1

ml 1N NaOH,，混勻至全部溶解,。加重蒸水至1000mlzui后再加3ml重蒸水（Nacl：0.195mol）,。終密度1.006g/cm³，PH10.37,。

B液：加24.98g NaBr 到100ml A液中,。終密度1.182g/cm³。（Nacl：0.195mol,， NaBr：7.65mol）,，PH9.72。

C液：加78.32g NaBr 到100ml A液中,。終密度1.478g/cm³,。（Nacl：0.195mol， NaBr：7.65mol）,，PH8.86,。

（二）離心機(jī)及轉(zhuǎn)頭

• 離心機(jī)：Hitachi CP-MX系列超速離心機(jī)或其他類似機(jī)組。

Hitachi CS-150GXL微量超速離心機(jī),。

• 轉(zhuǎn)頭,，離心管；S 140 AT：140,000rpm,1,050,000×g,，10×2ml,，K=5，1PC厚壁管,。

S 80 AT3：80,000rpm,415,000×g,，8×8ml，K=23,，6PC厚壁管,。

S 70 AT：70,000rpm,505,000×g，8×40ml,，K=44,，40PA管,。

（三）血漿-血球分離：

全血，角轉(zhuǎn)頭或甩平轉(zhuǎn)頭3000rpm×20min,，沉淀為血細(xì)胞,，上清血漿待用。

（四）乳糜粒分離：

• 離心參數(shù)：各種轉(zhuǎn)頭均可用,，4×10⁶（g×min）,，10℃

• 梯度液：離心管下部3/4容積為血漿，上部1/4容積為0.15MNacl+0.3MEDTA,。PH7.4,。

• 離心結(jié)果：乳糜粒上浮，離心管傾斜,，吸管貼管壁慢吸出（約占血漿容積的2~6%,。禁令12小時(shí)以上供血者血漿中乳糜含量很低，食后供血者含量較高,。

（五）血清脂蛋白分離：

（?。￢LDL分離（ρ<1.006g/cm³）

（ⅱ）LDL（含IDL）分離（1.006g/cm³<ρ<1.063g/cm³）

轉(zhuǎn)頭	離心管內(nèi)液體分布	離心參數(shù)	結(jié)果
S140AT （CS-150GXL機(jī)組）	*次離心后上部VLDL取出，下部600μl移入另一離心管,，加入300μl B液,，充分混合	140，000rpm×80min 16℃ 加速：9 減速：7	上部1/3體積LDL+IDL吸出
S80AT₃ （CS-150GXL）	*次離心后上部VLDL吸出,，,，下部3.4ml移入另一離心管，加入1.7ml B液并充分混合	80,，000rpm×5.5hrs 16℃ 加速：9減速：7	同上
P70AT （CP-MX系列超速機(jī)或類似機(jī)型）	*次離心后上部11.7ml吸出,，下部約24ml 移入另一離心管，加入11.7ml B液,，充分混合	70,，000rpm×10hrs 16℃ 加速：9 減速：6	同上

（ⅲ）HDL分離（1.063g/cm³<ρ<1.21g/cm³）

轉(zhuǎn)頭	離心管內(nèi)液體分布	離心參數(shù)	結(jié)果
S140AT （CS-150GXL機(jī)組）	第二次離心后吸出上部300μl后，下部600μl移入另一離心管,，加入300μl C液,，充分混合	140，000rpm×140min 16℃ 加速：9 減速：7	可見較明顯分層,，上部為HDL，下部為血清白蛋白及球蛋白
S80AT₃ （CS-150GXL機(jī)組）	第二次離心后吸出上部約1.7ml,、下部3.4ml移入另一離心管,，加入1.7ml C液,，充分混合	80，000rpm×8小時(shí) 16℃ 加速：9 減速：7	同上
P70AT （CP-MX系列機(jī)或其他類型機(jī)組）	第二次離心后吸出上部1/3,、下部2/3移入另一離心管,，加入約12ml C液，充分混合	70,，000rpm×15小時(shí) 16℃ 加速：9 減速：6	同上

（本文部分實(shí)驗(yàn)由上海長海醫(yī)院賈鳳玉完成）

參考文獻(xiàn)

（1）余興明：“血清脂蛋白的離心分離技術(shù)”,，“生命的化學(xué)”，1997.3

（2） Hitachi KoKi：“himac Application’,No:89,1999.7 03,，2000.10

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