（蒸餾后4-氨基安替比林分光光度法）

一,、儀器：

智能一體化蒸餾儀；

分光光度計(jì),；

比色皿（1cm）；

梨形分液漏斗（500ml）;

容量瓶（250ml）;

量筒（250ml;50ml）;

脫脂棉,；

吸耳球,；

二,、試劑： 0.1%甲基橙指示劑,；

10%硫酸銅溶液；

8%磷酸溶液,；

2% 4-氨基安替比林溶液,；

8%鐵氰化鉀溶液；

20%銨-氯化銨緩沖液,；

三,、步驟：

1、水樣預(yù)蒸餾：取水樣250ml置于蒸餾瓶中,，加4滴甲基橙指示劑（為調(diào)色用）,，再加入3ml硫酸銅溶液，用磷酸溶液調(diào)節(jié)PH值為4（溶液呈橙紅色）,，zui后加入25ml蒸餾水,，然后連接冷凝器加熱蒸餾（無須外接冷凝器，設(shè)備自帶密閉式冷凝水循環(huán)回流,，節(jié)能降耗），用250ml容量瓶做接收,，接收到250ml標(biāo)線為止（該裝置可自動(dòng)偵測終點(diǎn),，無須人工值守）。
2,、將餾出液移到梨形分液漏斗中,，加入2ml銨-氯化銨緩沖液，再加入1.5ml4-氨基安替比林溶液,，zui后加1.5ml鐵氰化鉀溶液（注：若顏色較深,，則需稀釋,，稀釋倍數(shù)可依據(jù)顏色深淺而定,。）充分混勻后,，準(zhǔn)確加入10ml三氯甲烷,，蓋上蓋塞，用力搖120下（10,；10；30,；35,；35），不斷放氣,，靜置分層,。用脫脂棉擦拭梨形分液漏斗管內(nèi)壁，將管內(nèi)壁塞入一小撮脫脂棉,，zui后用比色皿接取經(jīng)脫脂棉濾出的分層液,，用分光光度計(jì)于460nm波長處進(jìn)行比色,，用三氯甲烷做參比,，測量其吸光度。同時(shí)做空白試驗(yàn),。

3,、計(jì)算：

      Y=（0.0185X+0.0372）/250×稀釋倍數(shù)

式中：Y=水樣吸光度－空白吸光度

四、試劑配制：

   1,、0.1%甲基橙指示劑：稱取0.1g甲基橙稀釋至100ml蒸餾水中,，*溶解后過濾。

2,、10%硫酸銅溶液：稱取100g硫酸銅溶于水中,，稀釋至1000ml,混勻。

3,、8%磷酸溶液：量取100ml85%磷酸用水稀釋至1000ml，混勻,。

4,、2%4-氨基安替比林溶液：稱取2g4-氨基安替比林溶于100ml水中，混勻,。

5,、8%鐵氰化鉀溶液：稱取8g鐵氰化鉀溶于100ml水中，混勻,。

6,、20%銨-氯化銨緩沖液：稱取20g氯化銨，溶于100ml氨水中,，混勻。

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