實(shí)驗記錄手冊|細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗的離心機(jī)選擇
細(xì)胞培養(yǎng)(cell culture)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境(無菌,、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等),使之生存,、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法,。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù),,在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對于整個生物工程技術(shù),,還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說,,細(xì)胞培養(yǎng)都是一個*的過程,,細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)模克隆,。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個細(xì)胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞,,這是克隆技術(shù)*的環(huán)節(jié),而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆,。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù),,通過細(xì)胞培養(yǎng)既可以獲得大量細(xì)胞,又可以借此研究細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo),、細(xì)胞的合成代謝,、細(xì)胞的生長增殖等。
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗室組建的基本要求:
1,、細(xì)胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù),,要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。
2,、細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計原則是防止微生物污染和有害因素影響,,要求工作環(huán)境清潔、空氣清新,,干燥和無煙塵,。
3、細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動的內(nèi)側(cè),,常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室,,為10萬級潔凈環(huán)境的潔凈室。而洗刷消毒工作設(shè)在潔凈室外,,避免物品污染潔凈室內(nèi)環(huán)境,。細(xì)胞潔凈室需要一個空調(diào)系統(tǒng)并對外界保持一定的正壓。
4,、解剖實(shí)驗室主要用于對器官組織的分離,,需要有無菌操作臺、解剖顯微鏡,、各種手術(shù)器材等,。
組織細(xì)胞培養(yǎng)室除一般實(shí)驗室的普通常規(guī)設(shè)備外,尚有一些特殊需要的設(shè)備,?;究煞譃閮纱箢悾?/span>
I. 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗室常用的基本儀器設(shè)備
1.顯微鏡:倒置顯微鏡——是組織細(xì)胞培養(yǎng)室所必需的日常工作常規(guī)使用設(shè)備之一,便于掌握細(xì)胞的生長情況并觀察有無污染等,。
2.培養(yǎng)箱:體外培養(yǎng)的細(xì)胞和體內(nèi)細(xì)胞一樣,,需要在恒定的溫度下生存,大多數(shù)情況下,適溫度是37℃,,溫差變化一般不應(yīng)超過±0.5℃,,細(xì)胞在溫度升高2℃ 時,持續(xù)數(shù)小時即不能耐受,,40℃以上將很快死亡,。因此需要有能控制溫度的培養(yǎng)箱,如具有較高靈敏度的恒溫培養(yǎng)箱及CO2培養(yǎng)箱,。
3.干燥箱:用于細(xì)胞培養(yǎng)箱的有些器械,、器皿需要烘干后才能使用,玻璃器皿等須干熱消毒,。
4.水純化裝置:細(xì)胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高,,細(xì)胞培養(yǎng)以及與細(xì)胞培養(yǎng)工作相關(guān)的液體的配制用水必須事先嚴(yán)格純化處理。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時配制各種培養(yǎng)液及試劑等均需使用三次蒸餾水:即使是用于玻璃器皿的沖洗,,也應(yīng)使用二次以上蒸餾水,。
5.冰箱:細(xì)胞培養(yǎng)室必須配備。
a,、普通冰箱或冷藏柜——儲存培養(yǎng)液,、生理鹽水等培養(yǎng)用的物品及短期保存組織標(biāo)本。
b,、低溫冰箱(-20℃)——用于儲存需要冷凍保存生物活性及較長時期存放的制劑,,如酶、血清等,。
6.細(xì)胞冷凍儲存器:儲存器常用的是液氮容器,。根據(jù)使用需要分為不同的類型及多種規(guī)格。選擇購置液氮容器時要綜合考慮容積大小,,取放使用方便及液氮揮發(fā)量(經(jīng)濟(jì))三種因素,。
7.離心機(jī):進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時,,常規(guī)需要進(jìn)行制備細(xì)胞懸液,、調(diào)整細(xì)胞密度、洗滌,、收集細(xì)胞等工作,,通常需要使用實(shí)驗室離心機(jī)。一般可常規(guī)配置4000rpm的臺式離心機(jī),,例如細(xì)胞沉降,,使用低速離心機(jī)即可,離心力過大有時可能引起細(xì)胞的損傷,。
8.天平:常用的有扭力天平,、精密天平及各種電子天平。
9.消毒器:一般為高壓蒸汽滅菌鍋,直接或間接與細(xì)胞接觸的物品均需消毒滅菌處理,。
10.濾器:目前細(xì)胞培養(yǎng)工作中采用的培養(yǎng)用液,,包括人工合成培養(yǎng)液、血清,、消化用胰酶等常含有維生素,、蛋白、多肽,、生長因子等物質(zhì),,這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能,因而上述液體多采用濾過消毒以除去細(xì)菌,。目前常使用的濾器有玻璃濾器和微孔濾器,,各種濾器有其使用原理和特點(diǎn)。
常用的培養(yǎng)器皿:
培養(yǎng)用器皿是供細(xì)胞接種,、生長等用的器皿,,可由透明度好、無毒的中性硬質(zhì)玻璃或無毒而透明光滑的特制塑料制成,。細(xì)胞培養(yǎng)中需要的各種耗材,各類細(xì)胞培養(yǎng)板,,細(xì)胞培養(yǎng)瓶,平皿移液管等,。
培養(yǎng)瓶:由玻璃或塑料制成,。主要用于培養(yǎng)、繁殖細(xì)胞,。進(jìn)行培養(yǎng)時培養(yǎng)瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞,,膠塞多用于密封培養(yǎng)。
培養(yǎng)皿:由玻璃或塑料制成,,供盛取,、分離、處理組織或做細(xì)胞毒性,、集落形成,、單細(xì)胞分離、同位素?fù)饺?、?xì)胞繁殖等實(shí)驗使用,。常用的培養(yǎng)皿規(guī)格有 10cm、9cm,、6cm,、3.5cm等。
多孔培養(yǎng)板:為塑料制品,??晒┘?xì)胞克隆及細(xì)胞毒性等各種檢測實(shí)驗使用,。其優(yōu)點(diǎn)是節(jié)約樣本及試劑,可同時測試大量樣本,,易于進(jìn)行無菌操作,。培養(yǎng)板分為各種規(guī)格,常用的規(guī)格有:96孔,、24孔,、12孔、6孔,、4孔等,。
II、細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗室特殊設(shè)備
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗室除了應(yīng)配備上述的常用基本設(shè)備以外,,如有條件,,可添置一些特殊或先進(jìn)的設(shè)備儀器,以便更有效,、更精確,、更深入地進(jìn)行實(shí)驗室工作。例如:
(1)酶聯(lián)免疫檢測儀——可用于進(jìn)行免疫學(xué)測定及細(xì)胞毒性,、藥物敏感性檢測等,。
(2) 超低溫冰箱(-80℃)——便于儲存某些試劑及標(biāo)本。
(3)旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器——用于某些特殊細(xì)胞或需要收獲大量細(xì)胞的培養(yǎng),。
(4) 熒光顯微鏡——進(jìn)行熒光染色樣本的觀察,。
(5) 流式細(xì)胞儀——可更精確及快速檢測細(xì)胞。
(6)用于檢測細(xì)胞培養(yǎng)條件的各種儀器,,例如專門為快速分析細(xì)胞培養(yǎng)基中主要或關(guān)鍵營養(yǎng)成分,、代謝產(chǎn)物及氣體含量設(shè)計的多功能細(xì)胞培養(yǎng)分析儀、手提式CO2濃度測定儀等,。
很多人會詢問,,細(xì)胞培養(yǎng)獲得成功的關(guān)鍵要素是什么? 小編的經(jīng)驗就是:
1了解所培養(yǎng)細(xì)胞的生長周期;
2 細(xì)心+實(shí)驗條件允許
3 培養(yǎng)細(xì)胞需要有備份的條件下去嘗試新的培養(yǎng)方式,,否則實(shí)驗失敗了導(dǎo)致細(xì)胞株也沒了,。實(shí)驗記錄詳細(xì)完整也是很關(guān)鍵的
4 選擇合適的實(shí)驗室儀器。
今天,,小編就給大家推薦適合于細(xì)胞培養(yǎng)的離心機(jī) —— FC5706
精工設(shè)計 經(jīng)典之作
FrontierTM 5000系列離心機(jī)均為*產(chǎn)品,,可為您的樣品提供快速有效的分離。
FrontierTM 5000系列實(shí)驗室臺式離心機(jī)包括微量高速及小型臺式多功能兩類,,出色的性能及多樣的配置是各類生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)實(shí)驗室理想的離心工具,。
產(chǎn)品特點(diǎn):
● 操作簡便,、顯示直觀
全系采用雙行背光液晶顯示,可實(shí)時顯示所有信息,便于調(diào)節(jié)和運(yùn)行觀察,。常規(guī)設(shè)置無需進(jìn)入二級菜單,,減少過多二級操作。采用旋鈕加按鍵設(shè)計,,方便用戶調(diào)節(jié)的同時增加控制系統(tǒng)使用壽命,。
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配置有加減速系統(tǒng),、轉(zhuǎn)子信息系統(tǒng),、固定編程系統(tǒng)、預(yù)冷卻系統(tǒng)(視不同機(jī)型)等,,可根據(jù)用戶實(shí)驗做各類個性化信息設(shè)置,。多樣的轉(zhuǎn)子選擇,可以滿足生命科學(xué)及醫(yī)學(xué)實(shí)驗室對各種轉(zhuǎn)速及離心容量的需求,。
● 原裝品質(zhì),、安全保障
整機(jī)德國*,多項安全設(shè)計及穩(wěn)定性驗證為您提供更好的實(shí)驗保障,。全系采用無碳刷變頻馬達(dá),,多層安全監(jiān)控。為用戶提供靜音安心的離心環(huán)境,。
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