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關(guān)于激光共聚焦顯微鏡,，你知道多少,？
激光掃描共聚焦熒光顯微鏡是一種利用計算機,、激光和圖像處理技術(shù)獲得生物樣品三維數(shù)據(jù)、目前較先進的分子細胞生物學的分析儀器,。主要用于觀察活細胞結(jié)構(gòu)及特定分子,、離子的生物學變化，定量分析，以及實時定量測定等,。
激光共聚焦顯微鏡原理：利用放置在光源后的照明針孔,，和放置在檢測器前的探測針孔，實現(xiàn)點照明和點探測,。來自光源的光通過照明針孔發(fā)射出的光聚焦在樣品焦平面的某個點上,，該點所發(fā)射的熒光成像在探測針孔上，該點以外的任何發(fā)射光均被探測針孔阻擋,。照明針孔與探測針孔對被照射點或被探測點來說是共軛的,，因此被探測點即共焦點，被探測點所在的平面即共焦平面,。
計算機以像點的方式將被探測點顯示在計算機屏幕上,，為了產(chǎn)生一幅完整的圖像，由光路中的掃描系統(tǒng)在樣品焦平面上掃描,，從而產(chǎn)生一幅完整的共焦圖像,。只要載物臺沿著Z軸上下移動，將樣品新的一個層面移動到共焦平面上,，樣品的新層面又成像在顯示器上,，隨著Z軸的不斷移動，就可得到樣品不同層面連續(xù)的光切圖像,。
與傳統(tǒng)光學顯微鏡的區(qū)別
傳統(tǒng)熒光顯微鏡有一個難以克服的缺點：焦平面以外的熒光結(jié)構(gòu)模糊,、發(fā)虛。原因是大多數(shù)生物學標本是重疊結(jié)構(gòu),，假若熒光標記的結(jié)構(gòu)在不同層次上都有分布,，且重疊，來自焦平面上方或下方的散射熒光也被物鏡所接收,，熒光顯微鏡的分辨率就要大大降低,。
在傳統(tǒng)光學顯微鏡基礎(chǔ)上，激光掃描共聚焦顯微鏡用激光作為光源,，采用共軛聚焦原理和裝置,，并利用計算機對所觀察的對象進行數(shù)字圖像處理觀察、分析和輸出,?？梢詫悠愤M行斷層掃描和成像，進行無損傷觀察和分析細胞的三維空間結(jié)構(gòu),。同時,，利用免疫熒光標記和離子熒光標記探針，該技術(shù)不僅可觀察固定的細胞,、組織切片,還可以對活細胞的結(jié)構(gòu),、分子,、離子及生命活動進行實時動態(tài)觀察和檢測，在亞細胞水平上觀察諸如Ca2+,，pH值，膜電位等生理信號及細胞形態(tài)的變化,，成為形態(tài)學,、分子細胞生物學、神經(jīng)科學,、藥理學,、遺傳學等領(lǐng)域中新一代強有力的研究工具。
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