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電泳系統(tǒng)原理

來源:北京眾力挽生物科技有限公司   2019年12月20日 09:45  

電泳是指帶電顆粒在電場的作用下發(fā)生遷移的過程,。許多重要的生物分子,,如氨基酸、多肽,、蛋白質(zhì),、核苷酸、核酸等都具有可電離基團(tuán),,它們在某個(gè)特定的pH值下可以帶正電或負(fù)電,,在電場的作用下,這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動(dòng),。電泳技術(shù)就是利用在電場的作用下,,由于待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異,,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度,,從而對(duì)樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純的技術(shù),。


電泳裝置主要包括兩個(gè)部分:電源和電泳槽,。電源提供直流電,在電泳槽中產(chǎn)生電場,,驅(qū)動(dòng)帶電分子的遷移,。電泳槽可以分為水平式和垂直式兩類。垂直板式電泳是較為常見的一種,,常用于聚丙烯酰胺凝膠電泳中蛋白質(zhì)的分離,。電泳槽中間是夾在一起的兩塊玻璃板,玻璃板兩邊由塑料條隔開,,在玻璃平板中間制備電泳凝膠,,凝膠的大小通常是12cm ´ 14 cm,厚度為1mm~2 mm,,近年來新研制的電泳槽,,膠面更小、更薄,,以節(jié)省試劑和縮短電泳時(shí)間,。制膠時(shí)在凝膠溶液中放一個(gè)塑料梳子,在膠聚合后移去,,形成上樣品的凹槽,。水平式電泳,凝膠鋪在水平的玻璃或塑料板上,用一薄層濕濾紙連接凝膠和電泳緩沖液,,或?qū)⒛z直接浸入緩沖液中,。由于pH值的改變會(huì)引起帶電分子電荷的改變,進(jìn)而影響其電泳遷移的速度,,所以電泳過程應(yīng)在適當(dāng)?shù)木彌_液中進(jìn)行的,,緩沖液可以保持待分離物的帶電性質(zhì)的穩(wěn)定。


電泳過程必須在一種支持介質(zhì)中進(jìn)行,。Tiselius等在1937年進(jìn)行的自由界面電泳沒有固定支持介質(zhì),,所以擴(kuò)散和對(duì)流都比較強(qiáng),影響分離效果,。于是出現(xiàn)了固定支持介質(zhì)的電泳,,樣品在固定的介質(zhì)中進(jìn)行電泳過程,減少了擴(kuò)散和對(duì)流等干擾作用,。初的支持介質(zhì)是濾紙和醋酸纖維素膜,,目前這些介質(zhì)在實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)應(yīng)用得較少。在很長一段時(shí)間里,,小分子物質(zhì)如氨基酸,、多肽、糖等通常用濾紙或纖維素,、硅膠薄層平板為介質(zhì)的電泳進(jìn)行分離,、分析,但目前則一般使用更靈敏的技術(shù)如HPLC等來進(jìn)行分析,。這些介質(zhì)適合于分離小分子物質(zhì),操作簡單,、方便,。但對(duì)于復(fù)雜的生物大分子則分離效果較差。凝膠作為支持介質(zhì)的引入大大促進(jìn)了電泳技術(shù)的發(fā)展,,使電泳技術(shù)成為分析蛋白質(zhì),、核酸等生物大分子的重要手段之一。初使用的凝膠是淀粉凝膠,,但目前使用得多的是瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠,。蛋白質(zhì)電泳主要使用聚丙烯酰胺凝膠。

 

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