IHC(免疫組化)

　　是融合了免疫學(xué)原理(抗原抗體特異性結(jié)合)和組織學(xué)技術(shù)(組織的取材、固定,、包埋,、切片、脫蠟,、水化等),，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 (熒光素,、酶,、金屬離子、同位素)顯色,，來對(duì)組織(細(xì)胞)內(nèi)抗原進(jìn)行定位,、定性及定量的研究(主要是定位)。樣本是細(xì)胞或組織,，要在顯微鏡下觀察結(jié)果,，可能出現(xiàn)膜陽性、質(zhì)陽性和核陽性,。

　　ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))

　　用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色,，待測的樣品多是血清、血漿,、尿液,、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液，因而沒有用到組織包埋,、切片等技術(shù),，這是與免疫組化的主要區(qū)別，操作上開始需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面,，從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上,，這就是“吸附”的含義,。

　　免疫組化和elisa所用到的原理大致相同，只是因?yàn)樗鶛z測的樣品不同,，從而在操作方法上有所不同,。elisa多用于定量分析，其靈敏度非常高,。

　　Western bolt (蛋白質(zhì)印跡法)

　　先要進(jìn)行SDS-PAGE,，然后將分離開的蛋白質(zhì)樣品用電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)移到固相載體上，而后利用抗原-抗體-標(biāo)記物顯色來檢測樣品,，可以用于定性和半定量,。

　　【1】.對(duì)于IHC來說，定位是免疫組化大的優(yōu)勢

　　該方法可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位, 因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察,，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究,，相比于其他蛋白檢測方法，免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確,、定性靈敏度高,，是定位檢測分析方法對(duì)病理學(xué)領(lǐng)域開展深入研究是十分有意義，尤其對(duì)于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用,。

　　【2】WB與IHC技術(shù)相比,，定量可能更加準(zhǔn)確

　　當(dāng)然WB也可定性和定位(通過提取膜蛋白或核蛋白、胞漿蛋白分別檢測其中抗原含量,，進(jìn)而間接反映它們的定位),，但敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于IHC。

　　【3】ELISA與IHC相比,，定量準(zhǔn)確,，是分泌性蛋白檢測方法之一。

　　尤其對(duì)于微定量分析多個(gè)樣本非常有用,，所用試劑和樣品量很少,，結(jié)果精確。IHC針對(duì)性比較強(qiáng),，而且一般是以組織或者細(xì)胞為樣本,，而ELISA一般是使用血清或者組織磨碎液。免疫組化可以快速檢測樣本中抗體的陽性或者陰性,，一般不用于定量檢測,。

　　【4】WB和ELISA的區(qū)別

　　western blotting：可以看到特異性的條帶，但是定量比較煩

　　ELISA：可以直接讀出濃度,，但是如果抗體有非特異性結(jié)合,，那得到的數(shù)值就不可信。

　　WB：只能半定量,但是可以檢測細(xì)胞膜蛋白,這點(diǎn)elisa做不到

　　ELISA：可用定量方法檢測蛋白,也就是說可以觀察不同濃度刺激物對(duì)目的蛋白的影響

　　WB：所檢測的一般是抗原,，而elisa抗原抗體都可以檢測,。

　　WB：所檢測的抗原可以知道其分子量的大小,，或是否是多聚體、降解產(chǎn)物等,，一句話,，WB可以確定所用抗體是與哪種蛋白起作用的;而elisa無能為力，一鍋端了,。

　　WB：所適用的一抗一般是線性位點(diǎn)的,，elisa線性或構(gòu)象型抗體都可以使用。從另一個(gè)意義上講,，WB可以做抗體是線性位點(diǎn)還是構(gòu)象型位點(diǎn)的補(bǔ)充判定,，而elisa不行。

　　WB：一次處理量就是一塊膠版,，10-20個(gè)樣品多了,。elisa一塊96孔板一次可以處理96個(gè)樣本，可以設(shè)置多個(gè)復(fù)孔,、對(duì)照,、梯度樣等來提高檢測的可信度。

　　WB：操作常見的非特異性條帶,，膜本底差,，顯色不好等等缺點(diǎn)在elisa上表現(xiàn)得要好得多。

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