本文整理 LCMSMS和LCMS定量分析 的幾個(gè)問題，以及LCMSMS定量分析的實(shí)例供大家了解,！

LCMSMS如何用內(nèi)標(biāo)定量分析,？

Q：本人現(xiàn)在用三重四級(jí)桿LCMSMS定量分析目標(biāo)物，但是沒有標(biāo)準(zhǔn)品,。內(nèi)標(biāo)法該具體怎么操作呢,？資料說先配制一定重量比的待測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)樣品的混合物做色譜分析，測(cè)量峰面積,，做重量比和面積比的關(guān)系曲線,，此曲線即為標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果這樣的話,，沒有標(biāo)準(zhǔn)品怎么辦,？

方法一：

1、內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析,，同樣需要待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品,。如果沒有待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品就不能準(zhǔn)確測(cè)量其含量，因?yàn)闊o法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

2,、沒有待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品不能準(zhǔn)確測(cè)量其含量，但可以通過加入內(nèi)標(biāo)的方法測(cè)量待測(cè)物的相對(duì)含量,，可以比較待測(cè)物在各樣品中的多少及相差倍數(shù),。

3、用LCMSMS做定量一般都采用MRM的掃描方式,，你沒有待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品,，就無法建立和優(yōu)化MRM掃描的質(zhì)譜參數(shù)，這樣你只能使用FULL SCAN或SIM的掃描方法,。沒有待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品,，你也無法準(zhǔn)確得到待測(cè)物在LC上的保留時(shí)間，如果你的樣品中有與待測(cè)物相似質(zhì)量數(shù)的化合物,，你得到的色譜峰就不會(huì)很純凈,，會(huì)對(duì)你判定那個(gè)是你的待測(cè)化合物產(chǎn)生干擾。

方法二：沒有標(biāo)準(zhǔn)品,，就只用面積相對(duì)定量,。然后選用LCMSMS的SIM模式（樣品雜質(zhì)比較少，選擇同位素豐度為100%的分子量,，上下增減0.2）,。考察因素導(dǎo)致的量的改變比較微量,，選擇一種物質(zhì)為回收率指示物（反應(yīng)液前處理前加入）,，一種物質(zhì)為內(nèi)標(biāo)物（前處理后,、液相小瓶中進(jìn)樣測(cè)試前，在待測(cè)樣品中加入定量的內(nèi)標(biāo)物,，然后進(jìn)行測(cè)試）,。

LCMS可以進(jìn)行定量分析嗎？

Q：請(qǐng)問液質(zhì)聯(lián)用中質(zhì)譜跑出來用于定性的圖譜是什么樣的,，既然是用質(zhì)譜來進(jìn)行定量的話,，那色譜本身配置的紫外檢測(cè)器跑出來的圖譜用于何用？液質(zhì)聯(lián)用有SIM和全掃描的,，那么一般在藥物代謝動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)中一般用哪一種呢,？尤其是在對(duì)體內(nèi)藥物分析時(shí)，內(nèi)標(biāo)法用于定量的質(zhì)譜圖是什么樣的,？

質(zhì)譜定量分析,，使用的一般是LCMS/MS,不使用LCMS, 看一下質(zhì)荷比，推測(cè)下分子量,。UV可以用來定量,，但是在有紫外吸收的干擾峰的時(shí)候，定量是不準(zhǔn)的,。LCMS/MS使用母離子/子離子來進(jìn)行定量,，相對(duì)來說，干擾要少的多,，也比較準(zhǔn)確,，在PK/TK的應(yīng)用很廣泛。這里只有LCMS/MS定量的譜圖,，僅供參考,！

183.1/141.3 通道的是內(nèi)標(biāo)，其他的兩個(gè)是化合物,。

質(zhì)譜定量中已經(jīng)被廣泛接受的方式是MS/MS定量,。這種定量常通過三級(jí)四極桿或離子阱質(zhì)譜實(shí)現(xiàn)。要求使用MS/MS的原因是：許多化合物有同樣的質(zhì)量,。當(dāng)使用Di一個(gè)維度即單級(jí)質(zhì)譜MS去定量時(shí),，也會(huì)缺乏特異性，尤其是對(duì)于像血液那樣的復(fù)雜的基質(zhì),。Di二個(gè)維度的MS（即MS/MS）在大多數(shù)情況下,，能夠提供wei一的斷裂。合并特異的母離子質(zhì)量和wei一的碎片離子信息,，可以選擇性地監(jiān)測(cè)被定量的化合物。

LCMSMS定量分析實(shí)例

我想用LC-Q-TOF-MS 來做代謝組學(xué),，因?yàn)槭菢悠肥求w液含有多種化合物,，想加入內(nèi)標(biāo)后先進(jìn)行一個(gè)相對(duì)的定量來判斷含量發(fā)生變化的化合物，怎樣去定量？用總離子流圖好像不合適,，如果利用峰面積進(jìn)行相對(duì)定量的話,，用哪個(gè)圖比較合適？得用標(biāo)準(zhǔn)品才能定性嗎,？

LCMSMS定量分析使用SIM 或MRM模式,。*的MRM更為準(zhǔn)確。SIM使用Q選擇性的濾過選中的分子量,。但是分子量相同的化合物很多,，所以，如果樣品稍微復(fù)雜的話,，SIM基本不合適,。

MRM選擇母離子和子離子。使用Q過濾母離子,，q 轟擊母離子,，TOF過濾子離子，使子離子被檢測(cè)器檢測(cè)到,。分子量相同,，轟擊后產(chǎn)生的子離子不一樣的干擾離子就被排除了。所以,，MRM模式是更為可靠的LCMS定量分析方法,。MRM檢測(cè)是離子對(duì)。

內(nèi)標(biāo)的選擇原理是結(jié)構(gòu)基本和待測(cè)化合物類似,。結(jié)構(gòu)相同或類似,，主要是為了滿足被離子化的效率與樣品類似。這就是為什么很多都選擇使用該化合物或此類化合物的氘代化合物,。內(nèi)標(biāo)的選擇還要求其分子量與待測(cè)物質(zhì)不重合（還需要盡量避開化合物的isotopic peak的m/z）,，并且可以和待測(cè)物質(zhì)分開。

如果使用MRM, 樣品被分開的話,，那么理論上來說總離子流圖上的每個(gè)峰都是代表一種物質(zhì),。同時(shí)使用MRM模式，如果樣品們的分子量與子離子不重疊,，那么,，即使在柱子中不被分開的化合物，也是可以認(rèn)為在MS中被分開了,。

液質(zhì)中幾個(gè)峰,，MRM檢測(cè)到幾十個(gè)物質(zhì)就是多個(gè)物質(zhì)在同一時(shí)間從色譜柱跑出來了。雖然出峰時(shí)間一樣,，但是每個(gè)化合物的peak應(yīng)該是軟件中可以顯示出來的,，只不過報(bào)道中由于篇幅有限,，會(huì)被簡(jiǎn)略掉。

定性的話,，需要標(biāo)品,，retention time 需要一致。

定量的話,，需要先作標(biāo)準(zhǔn)曲線,。peak area ration vs concentration.