本文整理 LCMSMS和LCMS定量分析 的幾個(gè)問題,,以及LCMSMS定量分析的實(shí)例供大家了解,!
LCMSMS如何用內(nèi)標(biāo)定量分析?
Q:本人現(xiàn)在用三重四級(jí)桿LCMSMS定量分析目標(biāo)物,,但是沒有標(biāo)準(zhǔn)品,。內(nèi)標(biāo)法該具體怎么操作呢?資料說先配制一定重量比的待測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)樣品的混合物做色譜分析,,測(cè)量峰面積,,做重量比和面積比的關(guān)系曲線,此曲線即為標(biāo)準(zhǔn)曲線,,如果這樣的話,,沒有標(biāo)準(zhǔn)品怎么辦?
方法一:
1,、內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析,,同樣需要待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品。如果沒有待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品就不能準(zhǔn)確測(cè)量其含量,,因?yàn)闊o法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
2、沒有待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品不能準(zhǔn)確測(cè)量其含量,但可以通過加入內(nèi)標(biāo)的方法測(cè)量待測(cè)物的相對(duì)含量,,可以比較待測(cè)物在各樣品中的多少及相差倍數(shù),。
3、用LCMSMS做定量一般都采用MRM的掃描方式,,你沒有待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品,,就無法建立和優(yōu)化MRM掃描的質(zhì)譜參數(shù),這樣你只能使用FULL SCAN或SIM的掃描方法,。沒有待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品,你也無法準(zhǔn)確得到待測(cè)物在LC上的保留時(shí)間,,如果你的樣品中有與待測(cè)物相似質(zhì)量數(shù)的化合物,,你得到的色譜峰就不會(huì)很純凈,會(huì)對(duì)你判定那個(gè)是你的待測(cè)化合物產(chǎn)生干擾,。
方法二:沒有標(biāo)準(zhǔn)品,,就只用面積相對(duì)定量。然后選用LCMSMS的SIM模式(樣品雜質(zhì)比較少,,選擇同位素豐度為100%的分子量,,上下增減0.2)??疾煲蛩貙?dǎo)致的量的改變比較微量,,選擇一種物質(zhì)為回收率指示物(反應(yīng)液前處理前加入),一種物質(zhì)為內(nèi)標(biāo)物(前處理后,、液相小瓶中進(jìn)樣測(cè)試前,,在待測(cè)樣品中加入定量的內(nèi)標(biāo)物,然后進(jìn)行測(cè)試),。
LCMS可以進(jìn)行定量分析嗎,?
Q:請(qǐng)問液質(zhì)聯(lián)用中質(zhì)譜跑出來用于定性的圖譜是什么樣的,既然是用質(zhì)譜來進(jìn)行定量的話,,那色譜本身配置的紫外檢測(cè)器跑出來的圖譜用于何用,?液質(zhì)聯(lián)用有SIM和全掃描的,那么一般在藥物代謝動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)中一般用哪一種呢,?尤其是在對(duì)體內(nèi)藥物分析時(shí),,內(nèi)標(biāo)法用于定量的質(zhì)譜圖是什么樣的?
質(zhì)譜定量分析,,使用的一般是LCMS/MS,不使用LCMS, 看一下質(zhì)荷比,,推測(cè)下分子量。UV可以用來定量,,但是在有紫外吸收的干擾峰的時(shí)候,,定量是不準(zhǔn)的。LCMS/MS使用母離子/子離子來進(jìn)行定量,相對(duì)來說,,干擾要少的多,,也比較準(zhǔn)確,在PK/TK的應(yīng)用很廣泛,。這里只有LCMS/MS定量的譜圖,,僅供參考!
183.1/141.3 通道的是內(nèi)標(biāo),,其他的兩個(gè)是化合物,。
質(zhì)譜定量中已經(jīng)被廣泛接受的方式是MS/MS定量。這種定量常通過三級(jí)四極桿或離子阱質(zhì)譜實(shí)現(xiàn),。要求使用MS/MS的原因是:許多化合物有同樣的質(zhì)量,。當(dāng)使用Di一個(gè)維度即單級(jí)質(zhì)譜MS去定量時(shí),也會(huì)缺乏特異性,,尤其是對(duì)于像血液那樣的復(fù)雜的基質(zhì),。Di二個(gè)維度的MS(即MS/MS)在大多數(shù)情況下,能夠提供wei一的斷裂,。合并特異的母離子質(zhì)量和wei一的碎片離子信息,,可以選擇性地監(jiān)測(cè)被定量的化合物。
LCMSMS定量分析實(shí)例
我想用LC-Q-TOF-MS 來做代謝組學(xué),,因?yàn)槭菢悠肥求w液含有多種化合物,,想加入內(nèi)標(biāo)后先進(jìn)行一個(gè)相對(duì)的定量來判斷含量發(fā)生變化的化合物,怎樣去定量,?用總離子流圖好像不合適,,如果利用峰面積進(jìn)行相對(duì)定量的話,用哪個(gè)圖比較合適,?得用標(biāo)準(zhǔn)品才能定性嗎,?
LCMSMS定量分析使用SIM 或MRM模式。*的MRM更為準(zhǔn)確,。SIM使用Q選擇性的濾過選中的分子量,。但是分子量相同的化合物很多,所以,,如果樣品稍微復(fù)雜的話,,SIM基本不合適。
MRM選擇母離子和子離子,。使用Q過濾母離子,,q 轟擊母離子,TOF過濾子離子,,使子離子被檢測(cè)器檢測(cè)到,。分子量相同,,轟擊后產(chǎn)生的子離子不一樣的干擾離子就被排除了。所以,,MRM模式是更為可靠的LCMS定量分析方法,。MRM檢測(cè)是離子對(duì)。
內(nèi)標(biāo)的選擇原理是結(jié)構(gòu)基本和待測(cè)化合物類似,。結(jié)構(gòu)相同或類似,,主要是為了滿足被離子化的效率與樣品類似。這就是為什么很多都選擇使用該化合物或此類化合物的氘代化合物,。內(nèi)標(biāo)的選擇還要求其分子量與待測(cè)物質(zhì)不重合(還需要盡量避開化合物的isotopic peak的m/z),,并且可以和待測(cè)物質(zhì)分開。
如果使用MRM, 樣品被分開的話,,那么理論上來說總離子流圖上的每個(gè)峰都是代表一種物質(zhì),。同時(shí)使用MRM模式,如果樣品們的分子量與子離子不重疊,,那么,即使在柱子中不被分開的化合物,,也是可以認(rèn)為在MS中被分開了,。
液質(zhì)中幾個(gè)峰,MRM檢測(cè)到幾十個(gè)物質(zhì)就是多個(gè)物質(zhì)在同一時(shí)間從色譜柱跑出來了,。雖然出峰時(shí)間一樣,,但是每個(gè)化合物的peak應(yīng)該是軟件中可以顯示出來的,只不過報(bào)道中由于篇幅有限,,會(huì)被簡(jiǎn)略掉,。
定性的話,需要標(biāo)品,,retention time 需要一致,。
定量的話,需要先作標(biāo)準(zhǔn)曲線,。peak area ration vs concentration.
相關(guān)產(chǎn)品
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