在我們?nèi)粘５奈⑸餀z測(cè)工作和進(jìn)行的某些實(shí)驗(yàn)中,，經(jīng)常會(huì)遇到需要預(yù)估細(xì)菌懸液的細(xì)菌濃度問(wèn)題,，有時(shí)候我們需要精確計(jì)數(shù)細(xì)菌菌液濃度，會(huì)用到血球計(jì)數(shù)板來(lái)進(jìn)行計(jì)數(shù),；但有時(shí)我們只需要一個(gè)比較粗略的估計(jì)值即可,，這里小編推薦大家使用麥?zhǔn)媳葷岱ā?/span>

麥?zhǔn)媳葷峁苁荕cFarland發(fā)明的一種用于微生物比濁的不同濁度的標(biāo)準(zhǔn)濁度管。具體的配制方法是根據(jù)硫酸和氯化鋇的比例來(lái)定的,，有表可查,，這樣不同比例生成的硫酸鋇沉淀的濃度不同，且都有定值,。麥?zhǔn)媳葷峁艿呐浔热缦拢?/span>

這是傳統(tǒng)的麥?zhǔn)媳葷峁艿呐渲品椒?，目前也有市售的商品化產(chǎn)品，不需要自己配制,，并且還有由乳膠粒子懸浮液制成的麥?zhǔn)媳葷峁?，與傳統(tǒng)的麥?zhǔn)媳葷峁芟啾龋４鏁r(shí)間更長(zhǎng)也更穩(wěn)定,。但麥?zhǔn)媳葷峁芫唧w應(yīng)該怎么使用呢,？

麥?zhǔn)媳葷峁芄烙?jì)懸液中的細(xì)菌濃度具體操作方法

1、輕搖標(biāo)準(zhǔn)試管,。

2,、無(wú)菌操作將被測(cè)定的肉湯培養(yǎng)物加到與標(biāo)準(zhǔn)管相同直徑（大小）的無(wú)菌試管中,。

3,、以無(wú)菌操作向被測(cè)定試管加入無(wú)菌生理鹽水（NaCl）,，直到濃度與所要求的標(biāo)準(zhǔn)管的濃度相同。

4,、直接用眼睛看（需要經(jīng)驗(yàn),，誤差較大）。

5,、找張白紙,，打上平行直線，然后觀察讀數(shù)（如圖示,，利用光在不同濃度液體折射不同）,。

例如，需配大約100cfu/mL 的細(xì)菌菌液濃度：

1. 無(wú)菌操作用接種環(huán)挑取測(cè)試細(xì)菌的純培養(yǎng)物到盛有一定量無(wú)菌生理鹽水管中,，混懸,。

2. 以比色卡作為背景目測(cè)，直到濁度與0.5 麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)管的濁度相一致,，如上圖所示,。

3. 0.5 號(hào)麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)管相當(dāng)于1×108CFU/mL 濃度，以此為參照值,，取1mL 濁度跟0.5 號(hào)麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)管相一致的菌懸液到9mL 無(wú)菌生理鹽水管中,，作10 倍梯度稀釋107、106,、105……,，102 稀釋度含菌量大約為100cfu/mL。

注：1. 測(cè)試菌的純培養(yǎng)物可以是凍干菌株復(fù)蘇后純培養(yǎng)物,。

       2.本法僅供細(xì)菌液濃度的粗略計(jì)算。

注意事項(xiàng)：

1,、如果測(cè)定的肉湯培養(yǎng)物不澄清,，由培養(yǎng)物的值減去未接種培養(yǎng)基的值來(lái)校正細(xì)菌濃度。

2,、如果肉湯顏色很深,，把未接種試管放在標(biāo)準(zhǔn)管的后面讀數(shù)即可。

3,、測(cè)定好的細(xì)菌,，可以做一下梯度稀釋涂布計(jì)數(shù)。

4,、此種方法測(cè)定的準(zhǔn)確性不是很高,，如果是對(duì)細(xì)菌數(shù)量要求較精確的，請(qǐng)用紫外分光光度計(jì),。

5,、麥?zhǔn)媳葷嵋簯?yīng)放室溫暗處保存,，用前混勻，有效期為6個(gè)月,。應(yīng)用時(shí)為了準(zhǔn)確也可以使用比濁儀但一定要防止麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)管未搖勻或已過(guò)期失效,。

在微生物學(xué)檢驗(yàn)中，麥?zhǔn)媳葷岱ǔＷ鳛榧?xì)菌鑒定,、實(shí)驗(yàn)配制菌液時(shí)大致判斷細(xì)菌菌液濃度的一種方法,，通常認(rèn)為，如將配細(xì)菌菌液濃度配成0.5麥?zhǔn)媳葷峁軙r(shí),，相當(dāng)于1.0×108細(xì)菌數(shù)/ml,，由于方法本身就是一種估計(jì)的方法，所以盡管不同細(xì)菌大小差異很大,，但除了真菌孢子,，細(xì)菌的差別不大，結(jié)果不會(huì)有影響,。

附孢子菌懸液制作方法：

1. 菌種活化

將保藏菌接種在PDA斜面培養(yǎng)基試管中,，培養(yǎng)7d～14d，使生成大量孢子,。未制備孢子懸液時(shí),，不得拔去棉塞。每打開1支只供制備1次懸液,，每次制備孢子懸液必須使用新培養(yǎng)的霉菌孢子,。

2. 孢子懸液制備

在上述PDA斜面培養(yǎng)基中加入少量無(wú)菌蒸餾水，用無(wú)菌接種環(huán)輕輕刮取表面的新鮮霉菌孢子,，將孢子懸液置于250mL錐形瓶?jī)?nèi),，然后注入40mL洗脫液。

錐形瓶中加入直徑5mm的玻璃珠10?！?5粒與孢子混合,，具塞后置水浴振蕩器中不斷振蕩使成團(tuán)的孢子散開，然后用單層棉紗布過(guò)濾以除去菌絲,。將其裝入滅菌離心管中,，用離心機(jī)分離沉淀孢子，去上清液,。再加入40mL洗脫液,，重復(fù)離心操作3次。制成濃度為(0.8～1.2)×106spores/mL的霉菌孢子懸液,。若需要精確計(jì)數(shù),，則可以用改良察氏液體培養(yǎng)基稀釋孢子懸液，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。孢子懸液應(yīng)在當(dāng)天使用,，若不在當(dāng)天使用應(yīng)在 3℃～7℃保存,，并盡量在4d內(nèi)使用。