超聲波破碎儀在破碎大腸桿菌時(shí)的技巧

破碎大腸桿菌用于提取表達(dá)外源蛋白,，在使用超聲波破碎儀之前，用含有1%triton-X-100的PBS懸浮,，然后再破碎效果較好,，1%triton-X-100的作用還是很明顯的，對(duì)其他的一些細(xì)菌同樣起作用,，比如鏈霉菌,。

  細(xì)菌沉淀直接加樣品1buffer，再加5μl的巰基乙醇,，混勻,，離心，煮沸10min,，直接上樣,，染色脫色步驟如下:將膠放入適量的染色液微波爐里加熱1min(下次適當(dāng)補(bǔ)點(diǎn)醋酸即可),將染色液換成大量的水(自來(lái)水即可)在微波爐煮10min 就可以。在表達(dá)重組蛋白后用超聲波破碎細(xì)胞,，采用冰浴,，400w，破2s停1s,，但是不一會(huì)就產(chǎn)生大量泡沫,，影響了破碎功率，pbs和tris緩沖液都是這樣,，zui后都是破碎不*,，而我的目的蛋白就在這些未破碎的細(xì)胞中。

1,、會(huì)產(chǎn)生氣泡是因?yàn)槟愕奶筋^位置沒(méi)放好,。超聲波破碎儀探頭一定要接近底部,，約1cm（推薦是距底部0.5mm）。功率根據(jù)儀器不同會(huì)有所不同,，但你可以觀察液面,，有波動(dòng)但不要太劇烈就好。  

2,、破3s停10s,，破碎20-30個(gè)循環(huán)觀察效果。

3,、探頭位置擺放也要注意,，聽(tīng)聲音如果不對(duì)的話就要及時(shí)調(diào)整。另外可以從菌濃度方面考慮,。在使用超聲波破碎時(shí)試著加大體積,振幅不要超過(guò)60%.  

4,、嘗試超8s停8s,對(duì)有些菌體蛋白來(lái)說(shuō)，通常方法很難散熱,，導(dǎo)致蛋白變性產(chǎn)生氣泡,，zui好停頓時(shí)間稍長(zhǎng)一些，這種情況多見(jiàn)于包涵體形式的蛋白,。如果換用Branson超聲波破碎儀來(lái)進(jìn)行工作,，由于熱耗較小，停頓周期可適當(dāng)減小,。