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雙光束紫外-可見分光光度計(jì)核查操作規(guī)程

來源:鄭州安晟科學(xué)儀器有限公司   2019年11月25日 10:22  

雙光束紫外-可見分光光度計(jì)核查操作規(guī)程工作原理

紫外可見分光光度法是利用物質(zhì)分子對紫外可見光譜區(qū)的輻射的吸收來進(jìn)行分析的一種儀器分析方法,。這種分子吸收光譜產(chǎn)生于價(jià)電子能級的躍遷,,它廣泛用于無機(jī)和有機(jī)物質(zhì)的定性和定量分析,。

雙光束紫外-可見分光光度計(jì)朗伯一一比耳定律(Lambet -Beer)是光吸收的基本定律,俗稱光吸收定律,,是分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎(chǔ),。當(dāng)入射光波長一定時(shí),溶液的吸光度是吸光物質(zhì)的濃度c及吸收介質(zhì)厚度(吸收光程)的函數(shù),。其常用表達(dá)式如下(式中ε為系數(shù)):

A=ε·c·l

雙光束紫外-可見分光光度計(jì)是基于紫外可見分光光度法的原理工作的常規(guī)分析儀器,。根據(jù)光路設(shè)計(jì)的不同,紫外可見分光光度計(jì)可以分為單光束分光光度計(jì)、雙光束分光光度計(jì)和雙波長分光光度計(jì),。

1.2 適用范圍

雙光束紫外-可見分光光度計(jì)(以下簡稱儀器),,系指從單色器發(fā)出的單色光經(jīng)光束開關(guān)(斬光器)分成為樣品和參比兩條光束結(jié)構(gòu)的儀器。它能消除光源不穩(wěn)和放大器增益變化的影響,,并能自動(dòng)記錄和掃描物質(zhì)的吸收光譜圖,。儀器在開機(jī)后通常會(huì)做一些自檢,但仍應(yīng)按本規(guī)程進(jìn)行檢定,。儀器的波長范圍包括195~800nm,,狹縫為0.1~5nm可調(diào),。

1.3 制定依據(jù)

本規(guī)程主要參照國家計(jì)量檢定規(guī)程《JJG 178-2007紫外,、可見、近紅外分光光度計(jì)》,、《JJF 1641-2017紫外可見分光光度計(jì)型式評價(jià)大綱》及《中國藥典》2015年版四部指導(dǎo)通則“0401紫外-可見分光光度法”擬定,。

2.項(xiàng)目及技術(shù)要求

2.1 波長準(zhǔn)確度 ≤±1.0nm(紫外光區(qū)),≤±2.0nm(500nm附近),;

    波長重復(fù)性 ≤0.5nm,。

2.2 基線平直度 ≤0.01 吸光度。

2.3 0%線噪聲  ≤0.1%,,100%線噪聲  ≤0.5%.

2.4 吸光度準(zhǔn)確度 應(yīng)符合規(guī)定,。

2.5 雜散光 <0.8%。

2.6 光譜帶寬 ≤標(biāo)示帶寬±20%,。

2.7 吸收池配對誤差 ≤0.5%,。

3 檢測條件

3.1 環(huán)境條件

3.1.1 室溫為10~30℃,相對濕度應(yīng)小于65%,。

3.1.2 工作臺不受陽光直射,,室內(nèi)應(yīng)無腐蝕性或其它影響測定的氣體干擾。

3.1.3 周圍應(yīng)無影響檢定的強(qiáng)電場,、磁場和震動(dòng),。

3.1.4 儀器檢定前,須先開機(jī)預(yù)熱半小時(shí),。馬弗爐

3.2 設(shè)備

鈥玻璃校正片,。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和試劑

氧化鈥(分析純)、高氯酸(分析純),、重鉻酸鉀(基準(zhǔn)品),、硫酸(分析純)、碘鈉(分析純),、亞硝酸鈉(分析純),。

4 檢測方法

4.1 波長準(zhǔn)確度和波長重復(fù)性的檢測

4.1.1 用氧化鈥溶液的241.13、278.10,、287.18,、333.44,、345.47、361.31,、416.28,、451.30、485.29,、536.64和640.52nm的吸收值進(jìn)行檢定,。檢定時(shí)先配制4%氧化鈥的10%高氯酸溶液,將儀器波長設(shè)置為700~200nm范圍,,狹縫小于1nm,,以空氣為空白,調(diào)節(jié)透光率為100%,。取上述氧化鈥溶液,,置1cm石英吸收池中,放入樣品光路,,以適當(dāng)?shù)膾呙杷俣壤L制氧化鈥溶液的吸收圖譜并打印出峰值,,與規(guī)定值相比較。重復(fù)測定三次,,取平均值,,計(jì)算波長準(zhǔn)確度與重復(fù)性。

4.1.2 用鈥玻璃校正片代替氧化鈥溶液,,測定方法同上,,其尖銳吸收峰主要有279.4、287.5,、333.7,、360.9、418.5,、460.0,、484.5、536.2和637.5nm,,校正片使用前必須經(jīng)過校正,。

4.2 基線平直度的檢測

4.2.1 按儀器要求進(jìn)行基線校正后,調(diào)節(jié)狹縫2nm,,掃描速度中速,,取樣間隔1nm,樣品和參比光路均為空氣,。在儀器波長下限處加10nm,,波長上限處減50nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描,測量圖譜中起始點(diǎn)的吸光度與圖譜中偏離起始點(diǎn)多的吸光度(即大偏離點(diǎn))之差即為基線平直度。

4.2.2 允許繪制的基線在更換光源或?yàn)V光片時(shí)微有跳動(dòng),,必要時(shí)可在檢定前再進(jìn)行一次基線校正,。

4.3 0%線噪聲和100%線噪聲的測定

4.3.1 儀器設(shè)置為時(shí)間掃描方式,波長設(shè)置為250nm,,狹縫1nm,,樣品和參比光路均為空氣,調(diào)整透光率為100%,,用適當(dāng)?shù)膾呙杷俣茸鰰r(shí)間掃描2分鐘,,觀察100%線的變化,然后再將擋光塊插入樣品光路,,觀察0%線的變化2分鐘,,讀出各自峰的大(谷)值的差,與規(guī)定值比較,。

4.3.2 儀器設(shè)置時(shí)間掃描方式,,波長置500nm,,按上述方法測定500nm波長處的100%和0%線噪聲,。

4.3.3 如儀器無時(shí)間掃描方式,也可將儀器波長調(diào)至規(guī)定處,,用目視觀察2分鐘,,讀出各自峰的大(谷)值的差。

4.4 吸光度準(zhǔn)確度的檢測  將儀器波長設(shè)置于400~200nm,,狹縫1nm,,先用配對的吸收池均裝入0.005mol/L硫酸空白溶液,用合適的掃描速度記錄基線或自動(dòng)校正基線,,然后再將樣品光路改變放0.006%重鉻酸鉀硫酸溶液0.005mol/L硫酸空白溶液,,掃描并打印峰谷值,計(jì)算吸收系數(shù),,重復(fù)測定三次,,取其平均值與規(guī)定的吸收系數(shù)許可范圍進(jìn)行比較,應(yīng)符合表中的規(guī)定,。

波長(nm)

235

(?。?/p>

257

(大)

313

(小)

350

(大)

吸收系數(shù)(百分吸收系數(shù))的規(guī)定值

124.5

144.0

48.6

106.6

吸收系數(shù)(百分吸收系數(shù))的許可范圍

123.0~126.0

142.8~146.2

47.0~50.3

105.5~108.5

4.5 雜散光的檢查

測定前應(yīng)將擋光塊插入樣品池,,校正儀器零點(diǎn),,其透光率應(yīng)為0.0%。按下表列的試劑和濃度,,配置成水溶液,,置1cm石英吸收池中,在規(guī)定的波長處測定透光率,應(yīng)符合表中規(guī)定,。

 

試劑

濃度(%)

測定用波長(nm)

透光率(%)

碘鈉

1.00

220

<0.8%

亞硝酸鈉

5.00

340

<0.8%

4.6 光譜帶寬的測定

4.6.1 將儀器置于單光束能量測定方式,,波長范圍置于660~650nm,選擇小狹縫,,用合適的掃描速度進(jìn)行波長掃描,,繪制氘燈譜線,并使氘燈峰值為滿量程的三分之一,,測量氘峰的半峰寬即為小光譜帶寬,,與規(guī)定值比較。

4.6.2 沒有氘燈的儀器選擇汞燈546.1nm(或253.7nm)的特征譜線同4.6.1方法掃描并計(jì)算,。

4.7 吸收池配對誤差的檢測

4.7.1 取洗凈的石英吸收池盛滿水,,在220nm處,以其中一只透光率為100%,,再分別更換其它吸收池,,測其透光率,凡誤差在規(guī)定范圍內(nèi)的,,再分別裝入0.006%重鉻酸鉀的0.005mol/L硫酸溶液,,在350nm處,以其中一只透光率為100%,,分別測定其它吸收池,,凡透光率誤差在規(guī)定范圍內(nèi)的即為配對的吸收池。

4.7.2 取洗凈的玻璃吸收池盛滿水,,在660nm處,,以其中一只透光率為100%,再分別更換其它吸收池,,測其透光率,,凡誤差在規(guī)定范圍內(nèi)的,再分別裝入0.006%重鉻酸鉀的0.005mol/L硫酸溶液,,在400nm處,,以其中一只透光率為100%,分別測定其它吸收池,,凡透光率誤差在規(guī)定范圍內(nèi)的即為配對的吸收池,。

4.7.3 由于吸收池在不同波長吸光度有少許改變,在使用時(shí),,先測定配對誤差,,必要時(shí)應(yīng)扣除。

5 檢測結(jié)果處理

自檢結(jié)果全部符合技術(shù)要求者,,即為合格,,可以使用,。若檢測結(jié)果不符合規(guī)定,應(yīng)重新調(diào)試儀器再進(jìn)行自檢,,符合規(guī)定后方可使用,。

6 檢驗(yàn)周期

應(yīng)至少每年檢測一次,重要部件的維修和更換,、變動(dòng)放置地點(diǎn),、或?qū)x器性能有懷疑的,應(yīng)按本規(guī)程隨時(shí)進(jìn)行自檢,。

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