徠卡DM500熒光顯微鏡應(yīng)用方向

徠卡DM500熒光顯微鏡應(yīng)用方向

用于呼吸道,、口痰,、免疫蛋白等

      熒光顯微鏡是免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的基本工具,。它是由光源、濾板系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成,。是利用一定波長的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光,，通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標(biāo)本的熒光圖像。

   熒光顯微鏡和普通顯微鏡有以下的區(qū)別
熒光顯微鏡
1.照明方式通常為落射[1] 式,，即光源通過物鏡投射于樣品上,；
2.光源為紫外光，波長較短,，分辨力高于普通顯微鏡,；
3.有兩個(gè)特殊的濾光片，光源前的用以濾除可見光,，目鏡和物鏡之間的用于濾除紫外線,，用以保護(hù)人眼。
熒光顯微鏡也是光學(xué)顯微鏡的一種,，主要的區(qū)別是二者的激發(fā)波長不同,。由此決定了熒光顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)和使用方法上的不同。
熒光顯微鏡是免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的基本工具,。它是由光源,、濾板系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成。是利用一定波長的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光,，通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標(biāo)本的熒光圖像。

工作原理

光源

熒光顯微鏡工作原理
多采用200W的超高壓汞燈作光源,，它是用石英玻璃制作,，中間呈球形，內(nèi)充一定數(shù)量的汞,，工作時(shí)由兩個(gè)電極間放電,，引起水銀蒸發(fā)，球內(nèi)氣壓迅速升高,，當(dāng)水銀*蒸發(fā)時(shí),，可達(dá)50～70個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓力，這一過程一般約需5～15min,。超高壓汞燈的發(fā)光是電極間放電使水銀分子不斷解離和還原過程中發(fā)射光量子的結(jié)果,。它發(fā)射很強(qiáng)的紫外和藍(lán)紫光，足以激發(fā)各類熒光物質(zhì),，因此,，為熒光顯微鏡普遍采用。
超高壓汞燈也散發(fā)大量熱能,。因此,，燈室必須有良好的散熱條件,，工作環(huán)境溫度不宜太高。
新型超高壓汞燈在使用初期不需高電壓即可引燃,，使用一些時(shí)間后,，則需要高壓啟動(dòng)（約為15000V），啟動(dòng)后,，維持工作電壓一般為50～60V,，工作電流約4A左右。200W超高壓汞燈的平均壽命,，在每次使用2h的情況下約為200h,，開動(dòng)一次工作時(shí)間愈短，則壽命愈短,，如開一次只工作20min,，則壽命降低50%。因此,，使用時(shí)盡量減少啟動(dòng)次數(shù),。燈泡在使用過程中，其光效是逐漸降低的,。燈熄滅后要等待冷卻才能重新啟動(dòng),。點(diǎn)燃燈泡后不可立即關(guān)閉，以免水銀蒸發(fā)不*而損壞電極,，一般需要等15min,。由于超高壓汞燈壓力很高，紫外線強(qiáng)烈,，因此燈泡必須置燈室中方可點(diǎn)燃,，以免傷害眼睛和發(fā)生爆炸時(shí)造成操作。
超高壓汞燈（100W或200W）光源的電路和包括變壓,、鎮(zhèn)流,、啟動(dòng)幾個(gè)部分。在燈室上有調(diào)節(jié)燈泡發(fā)光中心的系統(tǒng),，燈泡球部后面安裝有鍍鋁的凹面反射鏡,，前面安裝有集光透鏡。
產(chǎn)超高壓汞燈GCQ-200型性能良好,，可以代替HBO-200等型的進(jìn)口燈泡,，平均壽命在200h以上，價(jià)格也比較低,。
我研制的一種簡易輕便型高色溫溴鎢熒光光源裝置,，體積小，重量輕,，功率小,，交,、直流兩用（自帶直流電源），易于攜帶,，使用方便,，已推廣應(yīng)用。

濾色系統(tǒng)

濾色系統(tǒng)是熒光顯微鏡的重要部位,，由激發(fā)濾板和壓制濾板組成,。濾板型號(hào)，各廠家名稱常不統(tǒng)一,。濾板一般都以基本色調(diào)命名,，前面字母代表色調(diào)，后面字母代表玻璃,，數(shù)字代表型號(hào)特點(diǎn),。如德產(chǎn)品（Schott）BG12，就是種藍(lán)色玻璃,，B是藍(lán)色的*.*/*個(gè)字母,，G是玻璃的*.*/*個(gè)字母；我產(chǎn)品的名稱已統(tǒng)一用拼音字母表示,，如相當(dāng)于BG12的藍(lán)色濾板名為QB24,，Q是青色（藍(lán)色）拼音的*.*/*個(gè)字母，B是玻璃拼音的*.*/*個(gè)字母,。不過有的濾板也可以透光分界濾長命名,，如K530，就是表示壓制濾長530nm以下的光而透過530nm以上的光,。還有的廠家的濾板*以數(shù)字命名,，如美Corning廠的NO：5-58，即相當(dāng)于BG12,。
1．激發(fā)濾板 根據(jù)光源和熒光色素的特點(diǎn)，可選用以下三類激發(fā)濾板,，提供一定波長范圍的激發(fā)光,。
紫外光激發(fā)濾板：此濾板可使400nm以下的紫外光透過，阻擋400nm以上的可見光通過,。常用型號(hào)為UG-1或UG-5,，外加一塊BG-38，以除去紅色尾波,。
紫外藍(lán)光激發(fā)濾板：此濾板可使300～450nm范圍內(nèi)的光通過,。常用型號(hào)為ZB-2或ZB-3，外加BG-38,。
紫藍(lán)光激發(fā)濾板：它可使350～490nm的光通過,。常用型號(hào)為QB24（BG12）,。
大吸收峰在500nm以上者的熒光素（如羅達(dá)明色素）可用藍(lán)綠濾板（如B-7）激發(fā)。
開始采用屬膜干涉濾板,，由于針對(duì)性強(qiáng),，波長適當(dāng)，因而激發(fā)效果比較玻璃濾更好,。如西德Leitz廠的FITCKP490濾板和羅達(dá)明的S546綠色濾板,，均遠(yuǎn)比玻璃濾板效果好。
激發(fā)濾板分薄厚兩種,，一般暗視野選用薄濾板,，亮視野熒光顯微鏡可選用厚一些?；疽笫且垣@得明亮的熒光和的背景為準(zhǔn),。
2．壓制濾板 壓制濾板的作用是*阻擋激發(fā)光通過，提供相應(yīng)波長范圍的熒光,。與激發(fā)濾板相對(duì)應(yīng),，常用以下3種壓制濾板：
紫外光壓制濾板：可通過可見光、阻擋紫外光通過,。能與UG-1或UG-5組合,。常用GG-3K430或GG-6K460。
紫藍(lán)光壓制濾板：能通過510nm以上波長的光（綠到紅）,，能與BG-12組合,。通常用OG-4K510或OG-1K530。
紫外紫光壓制濾板：能通過460nm以上波長的光（藍(lán)到紅）,，可與BG-3組合,，常用OG-11K470AK 490，K510,。