基于“病證結合”理論探討廣泛性焦慮心陰
虧虛證大鼠模型的構建與評價

摘要：目的：基于“病證結合”理論,，構建和評價廣泛性焦慮（generalized anxiety disorder, GAD)心陰虧虛證 大鼠模型,。方法:按隨機數字表法將32只SD大鼠隨機分為4組,，每組8只,，即空白組,、模型組、天王補心丸組,、di西泮片組,。根據先疾病后證型的思路進行造模,，除空白組外，其余3組大鼠通過不確定性空瓶應激法先建立 GAD模型,，再采用水環(huán)境小站臺睡眠剝奪法形成大鼠心陰虧虛證候模型，以此構建GAD心陰虧虛證模型,。造模 成功后,，空白組和模型組不給與任何處理，天王補心丸組,、di西泮片組分別給予天王補心丸,、di西泮片灌胃，1次/ d,連續(xù)干預21 d,。從宏觀表征,、微觀指標、以方驗證三個方面對模型進行評價,。每日觀察大鼠一般情況,。造模 前、造模后及干預第1,、2,、3周末采用高架十字迷宮實驗、曠場實驗觀察大鼠行為學變化,。造模前,、造模后及干預 第3周末檢測大鼠收縮壓、心率,、呼吸,、肛溫水平。干預第3周末采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應法（real - time PCR)檢測大鼠海馬GR mRNA表達水平,。結果：（1)宏觀表征：①行為學結果顯示：與空白組比較,，造模后、 造模后1周,、造模后2周,、造模后3周模型組OE%值、OT%值,、水平運動,、垂直運動均降低（P <0. 05)。②生命體 征結果顯示：與空白組比較,，造模后,、造模后3周模型組收縮壓均較低（P<0. 01);心率、呼吸,、肛溫均較高（P< 0.01),。（2)微觀指標:RT-PCR結果顯示：造模后3周,，與空白組比較，模型組大鼠海馬GR mRNA表達水平降 低（P <0. 01),。（3)以方驗證：①行為學結果：與模型組比較,，天王補心丸組、di西泮片組干預后各時間點OE%值,、OT%值,、水平運動、垂直運動均升高（P<0. 05);di西泮片組干預后各時間點OE%值,、干預第1,、周末OT%值、水平運動和干預第1,、周末垂直運動均升高（P <0. 01),。②生命體征結果：干預第3周末，與模型組比較,，天 王補心丸組,、di西泮片組收縮壓均升高（P <0. 05),心率、呼吸,、肛溫均降低（P <0. 05),。③RT - PCR結果：干預 第3周末，與模型組比較,，天王補心丸組,、di西泮片組大鼠海馬GR mRNA表達水平均升高（P <0. 05)。結論：采 用不確定性空瓶應激法結合水環(huán)境小站臺睡眠剝奪法成功構建了 GAD心陰虧虛病證結合模型,，該模型較為穩(wěn) 定,，可控性相對較強，值得進一步應用,。

關鍵詞：廣泛性焦慮;心陰虧虛;病證結合;模型

廣泛性焦慮癥（GAD)是常見的焦慮癥類型,，以泛化 或持續(xù)存在的焦慮為主要臨床表現，常伴有自主神經功能 紊亂及運動不安的癥狀¹,。中醫(yī)學認為心脾兩虛,、肝郁化 火和心腎不交是GAD的主要證型²。隨著現代生活節(jié)奏 的加快,，工作生活壓力的加大,，GAD證型逐步由肝郁化火 向心陰虧虛轉變³。近年來,，眾多學者^4-6聚焦于中醫(yī)藥 治療GAD的多靶點整體作用優(yōu)勢,，相繼報道了中藥、針灸、 推拿等對GAD的治療效果,。但是,，關于中醫(yī)藥治療GAD 的具體作用機制仍不清楚⁷。中醫(yī)診療講究對疾病進行 辨證論治,，但目前關于GAD的病證結合動物模型還不夠成 熟,，由于缺乏機制研究的載體，所以影響了 GAD的中醫(yī)應 用基礎研究進一步開展⁸,。因此,，建立穩(wěn)定的、可重復的,、 符合中醫(yī)病因bin機的GAD病證結合動物模型十分必要。 病證結合既是一種理論,，也是一種方法,，體現了現代中醫(yī) “據病言證，究證言法,，法隨證立,，方證相應”的診療思 路⁹。病證結合動物模型^[10 ,是基于中醫(yī)藥理論指導,，結 合現代醫(yī)學理論與實驗動物科學知識,，采用中醫(yī)學病因復 制證候動物模型，通過現代醫(yī)學病因復制疾病動物模型,，令 模型同時具有疾病與證候特征的一類造模方法,。本研究根 據病證結合理論，采用不確定性空瓶應激法^[11]建立GAD 疾病模型,，結合水環(huán)境小站臺睡眠剝奪法^[12造成心陰虧虛 證候模型,，終構建了 GAD心陰虧虛病證結合模型，并從 宏觀表征,、微觀指標,、以方驗證（天王補心丸）三個角度評 價了該模型

結果顯示：①行為學：與模型組比較，天王補心丸組,、di西泮片組干預后各時間點OE%值,、OT%值、水平運動,、垂 直運動均升高（P< 〇.〇5);di西泮片組干預后各時間點 OE%值,、干預第1、周末OT%值,、各時間點水平運動和干 預第1,、周末垂直運動均升高（P<0. 01)。②生命體征： 干預第3周末，與模型組比較,，天王補心丸組,、di西泮片組 收縮壓均升高（P < 0. 05),心率、呼吸,、肛溫均降低（P < 0. 05),。③RT - PCR:干預第3周末，與模型組比較,，天王補 心丸組,、di西泮片組大鼠海馬GR mRNA表達水平均升高 (P <0.05)。結果說明天王補心丸明顯改善了模型中GAD 心陰虧虛大鼠的焦慮癥狀及心陰虧虛狀況,。中醫(yī)學有‘‘方 證相應”之說,，方證相應強調了方劑與其作用對象之間的 相互作用，即方劑的功用是特定方藥與其作用對象特定證 之間相互作用的結果²⁶ ,故通過‘‘以方驗證”的方式可以 反證證候模型是否構建成功,。天王補心丸為中醫(yī)經典名 方,，具有滋陰養(yǎng)血、補心安神等功效,，主要用于心陰不足,，心 悸健忘，失眠多夢等癥,是治療GAD心陰虧虛證的代表性 方藥^27-28,。已有臨床研究²⁹證實,，采用天王補心湯治療 心陰不足型GAD可以達到和西藥同樣的抗焦慮效果。本 研究結果表明天王補心丸對GAD心陰虧虛大鼠的焦慮行 為及心陰虧虛表現均有明顯改善作用,。故從‘‘方證相關,， 以方驗證”的評價角度證實了本實驗模型的穩(wěn)定性和可靠 性。同時,，本研究結果也說明了天王補心丸在干預治療 GAD心陰虧虛大鼠時,，主要通過增加大鼠海馬組織內GR mRNA表達量以發(fā)揮抗焦慮作用。由此可知,，病證方藥緊 密聯系,，病證結合、方證相應,，天王補心丸切實地對GAD心 陰虧虛大鼠病證結合模型進行了驗證和評價,。

5結論

本研究采用不確定性空瓶應激法結合水環(huán)境小站臺睡 眠剝奪法構建了 GAD心陰虧虛病證結合模型，并且從宏觀 表征,、微觀指標,、以方驗證（天王補心丸)3個角度對模型進 行了評價。結果表明,，模型穩(wěn)定,、相對可控、造模理念符合 中醫(yī)病因bin機，值得推廣應用,。受實驗條件限制,，本模型的 微觀指標相對較少，有待進一步研究,。