二手熒光定量PCR儀因操作方便,、運行速度快,、實驗結果準確，受到越來越多的分子生物學研究者青睞,。在實驗技術成熟的今天,，也許對你來說，其難點不是實驗技術上的問題——而是 如何選購適合自己的熒光定量PCR儀 ——你要征詢實驗室成員的意見,、分析實驗室目前乃至將來的需求,、平衡實驗室的預算，更要詳細研究各種極富誘huo力的宣傳資料,。面對各種不同性能的產品,，您又該如何選擇呢？

首先建議大家走出認識二手熒光定量PCR儀的兩個誤區(qū)：

誤區(qū)一：儀器通道越多越好

隨著PCR技術的成熟運用,，多重擴增越來越熱鬧,，二手熒光定量PCR儀儀也不能幸免。從初期ABI公司推出的單通道二手熒光定量PCR儀儀發(fā)展到如今各個廠家都推出4通道,、5通道甚至6通道二手熒光定量PCR儀儀,，眼花繚亂的選擇讓人無所適從，就有人一不小心走進了“通道越多越好”的誤區(qū),。

在使用有些廠家5通道的熒光定量儀時,，為了確保實驗結果的性和準確性都要在實驗中使用ROX（一種熒光染料）或的Referencedye，這些熒光染料都應單獨使用一個檢測通道,。這樣以來,，能檢測多重PCR熒光信號的有效通道只有4個，而且使用校正染料可能會增加后期的使用成本,。有的二手熒光定量PCR儀的檢測通道是只為自已廠家的的熒光染料或試劑開放的,，有效檢測通道也絕非像宣傳資料中宣稱的那么多。在購買前確認二手熒光定量PCR儀儀器的有效檢測通道尤為重要,，不能單單只聽宣傳,。

考慮多重二手熒光定量PCR儀的通道數(shù)的時候也應該從實驗室實際情況出發(fā)，多重PCR并非人人適用,、人人可用,，因為它使實驗復雜化了，況且大多數(shù)實驗室熒光定量實驗常年只使用SYBRGreen一種染料，實在沒有必要選購更多通道,。

誤區(qū)二：real-timePCR儀無需梯度功能

對于使用染料法的定量PCR反應,，雖然有各種各樣的PCR引物設計軟件或者經驗公式計算熔解溫度（Tm值），但運用的公式不同,、引物序列不同，Tm值的差異會很大,。引物的熔解溫度決定了退火溫度,。而且模版中堿基的組合千變萬化，對于特殊片斷,，經驗公式得到的數(shù)據(jù)不一定能得出準確的結果,，退火溫度細微的差異對結果都可能產生決定性的影響，因而“摸條件”一度是讓人很頭疼的問題,。梯度PCR的出現(xiàn)部分解決了一些問題——在反應過程中每個孔的溫度控制條件可以在范圍內按照梯度變化,，根據(jù)結果，一步就可以摸索出適合的反應條件,。

不單退火溫度,，連變性溫度和延伸溫度都可以優(yōu)化——對于多種聚合酶混合酶擴增的多數(shù)高保真Taq酶來說這個非常重要，因為Taq和校正酶的反應溫度可能有顯著差異,，優(yōu)化延伸溫度就顯得很重要,。

使用有梯度功能的二手熒光定量PCR儀可以一次完成以往多次實驗才能完成的優(yōu)化過程，簡化了摸索PCR反應條件的繁瑣實驗,，既節(jié)省實驗時間提率,，又節(jié)省實驗成本。