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培養(yǎng)基配制滅菌方法

來源:東南科儀   2019年09月26日 10:07  

 

培養(yǎng)基,是指供給微生物,、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養(yǎng)物質組合配制而成的營養(yǎng)基質,。

一般都含有碳水化合物、含氮物質,、無機鹽(包括微量元素),、維生素和水等幾大類物質。培養(yǎng)基既是提

供細胞營養(yǎng)和促使細胞增殖的基礎物質,,也是細胞生長和繁殖的生存環(huán)境,。

培養(yǎng)基種類很多,根據配制原料的來源可分為自然培養(yǎng)基,、合成培養(yǎng)基,、半合成培養(yǎng)基;根據物理狀態(tài)可

分為固體培養(yǎng)基,、液體培養(yǎng)基,、半固體培養(yǎng)基;根據培養(yǎng)功能可分為基礎培養(yǎng)基,、選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)

基,、鑒別培養(yǎng)基等,;根據使用范圍可分為細菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基,、酵母菌培養(yǎng)基,、真菌培養(yǎng)基等。

培養(yǎng)基配成后一般需測試并調節(jié) pH,,還須進行滅菌,,通常有高溫滅菌和過濾滅菌。培養(yǎng)基由于富含營養(yǎng)

物質,,易被污染或變質,。配好后不宜久置,,zui好現(xiàn)配現(xiàn)用。

培養(yǎng)基制備過程

1.配料

配方換算→在容器中加入少量水(蒸餾水,,自然水)→按照配方稱取各種藥品(依次加入)→加足所需水

量(一藥一勺,,取藥后立即蓋上瓶蓋)。

2.溶解

淀粉溶解:少量冷水調成糊狀,。加熱溶解,,特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基,一定要煮沸,,瓊脂的熔解溫度

95-97℃ ,,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。

3.調 PH

 1N 的鹽酸或 1N  NaOH 把培養(yǎng)基調節(jié)到所要求的值,。

4.過濾

濾紙或棉花進行過濾,。(有時可以省去) [4]

5.分裝

一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。

(1)三角瓶

若作靜置培養(yǎng),,則 100ml 培養(yǎng)基/250ml 的三角瓶,,zui多不能超過 150ml 培養(yǎng)基/250ml 

三角瓶,否則滅菌時培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞,,造成染菌,;若作搖瓶培養(yǎng),則 15-20ml 培養(yǎng)基/250ml 

三角瓶,,保證通氣良好,。

(2)試管分裝

液體培養(yǎng)基一般裝 4-5ml,約試管的 1/4 高度,;

固體斜面培養(yǎng)基一般裝 3-4ml,,約試管的 1/5 高度。

6.包扎

分裝好后,,塞上棉塞,,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕,。

7.滅菌

按配方上要求的溫度,、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,,營養(yǎng)成分會被破壞,,培養(yǎng)

基中的糖、氨基酸會使培養(yǎng)基的顏色變深,。

8.擺斜面

滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放,,使其凝固成為一個斜面,約占試管長度的 1/2,。

9.貯存

培養(yǎng)基在 30℃下放置一天,,無污染的即可使用,。一般用牛皮紙包裹好存放于 2-8℃冰箱中備用

培養(yǎng)基配制好后為什么必須立即滅菌?

大家都知道,,培養(yǎng)基是供微生物生長,、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料,。由于微生物具有不同的營養(yǎng)類型,,對營養(yǎng)

物質的要求也各不相同,加之實驗和研究的目的不同,,所以培養(yǎng)基的種類很多,,使用的原料也各有差異。

為了達到實驗和研究的目的,,要按照培養(yǎng)基的配方進行配制,。而任何一種培養(yǎng)基一經制成就應及時*滅

菌,以備純 培養(yǎng)用,。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌,。

發(fā)酵過程中,培養(yǎng)基滅菌主要有以下幾個原因:如不滅菌,,會使生物反應的基質或產物,,因雜菌的消耗而

損失,造成生產能力的下降;雜菌也會產生代謝產物,,這 就使產物的提取更加困難,,造成得率降低,產品

質量下降;雜菌大量繁殖后,,會改變反應液的 pH 值,,使反應異常;有些雜菌會分解產物,使生產失敗;如果發(fā)

生噬 菌體污染,,生產菌細胞將被裂解,,使生產失敗。

培養(yǎng)基滅菌是殺滅培養(yǎng)基中本身的原著菌或在空氣中附著的雜菌,更好的讓目標菌生長(減少雜菌消耗培養(yǎng)

基中的營養(yǎng),,而且有些雜菌會抑制你目標菌的生長),。一般人工培養(yǎng)菌基本上是盡可能讓其生長快速或者產

生代謝產物,因此就讓其在zui適培養(yǎng)基上生長,以減少培養(yǎng)時間與提高經濟效益。

采用哪種高壓蒸汽滅菌,,推薦 ALP 高壓滅菌器

*,、滅菌效果強,、安全性高,、帶真空干燥功能、排氣功能,、使用壽命長(曾有客戶使用超過 15 年),,

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汽滅菌器脈沖空氣凈化反復進行,直至壓力高于對應溫度而產生過飽和蒸汽壓保證滅菌效果,。高壓蒸汽滅

菌器可根據被滅菌物質的情況調整蒸汽排放情況,,高壓蒸汽滅菌器具備快速冷卻功能可使滅菌后快速降溫

 80℃以下的安全溫度。ALP 高壓蒸汽滅菌器通過真空泵及經 0.2um 的濾膜過濾后的熱空氣快速干燥樣

品,,使其快速可用,。高壓蒸汽滅菌器標配物溫探頭安裝孔,選配物溫探頭,,方便進行內部滅菌效果的驗證,。

高壓蒸汽滅菌器三重脈沖,預真空設備配置強大的真空泵強行排空腔內留存的空氣,,使飽和蒸汽良好的滲

透入滅菌物品中,,從而確保充分有效的滅菌效果。

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