BHA（丁基羥基茴香醚）,，BHT（2,6- 二叔羥基對甲酚）,，TBHQ（特丁基對苯二酚）是常用的加于植物油中的酚類抗氧化劑。

     GB/T5009.30－2003介紹了BHA,、BHT的檢測方法,，但這個(gè)方法真的用起來卻使人一頭霧水，不僅步驟復(fù)雜,，而且效果很差,，漏洞很多，堪稱zui“使人困惑不解”的國標(biāo)方法,。

     該方法用石油醚溶解油樣,，過硅膠－弗羅里矽土（6+4）層析柱，再用100ml二氯甲烷分五次淋洗,，減壓揮干,，用二硫化碳定容后開機(jī)進(jìn)樣。儀器分析方面無懈可擊,，問題出在樣品前處理上,。

     首先層析柱如何裝填就是一個(gè)問題。按照方法,，需使用者自行裝填層析柱,，而手工裝填的層析柱松緊不一，很難控制質(zhì)量,。填的松了怕吸附不夠,，填的緊了淋洗速度奇慢，1小時(shí)也滴不出幾滴,，一個(gè)樣品可能要淋洗幾天,。

     洗脫時(shí)問題也有一個(gè)大漏洞，按照方法操作，無論如何小心都會(huì)洗出一部油分,，這些油分可怎么揮干呢,。難道用二硫化碳只是為了連油帶抗氧化劑一起溶解后進(jìn)樣嗎？如果油分進(jìn)了柱子,，可能進(jìn)不了幾個(gè)樣就污染到無法繼續(xù)的地步,。而且二硫化碳揮發(fā)性*，用它定容本身就不可靠,。

     如果按GB/T5009.30－1996,，幾乎不可能做成實(shí)驗(yàn)，且工作量大,，接觸毒物多,，然而既得不到準(zhǔn)確的結(jié)果，色譜柱也會(huì)很快報(bào)廢,。

     其實(shí),，植物油中的抗氧化劑檢測可以相當(dāng)簡單，甚至可以作為色譜初學(xué)者的入門功課,。前處理方法是：稱取1至2 克油樣，用10ml甲醇分三次萃取液（三次比例為4,，3,，3ml），合并萃取液上機(jī),。就這么點(diǎn)步驟,，而且實(shí)際效果很好，氣相液相都可以做,，同時(shí)還可用于處理TBHQ,，回收率一般都在90％以上。

     因此,，筆者實(shí)在不理解為什么有人放著簡單的方法不用,，而偏要用如此“使人困惑不解”的方法。

     關(guān)于國標(biāo)處理方法就討論到這里,，下面只討論用甲醇萃取的方法,。

     由于油樣的組成相當(dāng)復(fù)雜，與常用的有機(jī)試劑多少有一些混溶,。甲醇提取液中也會(huì)有一小部分的油分,，不信的話可以加一些水，純甲醇溶液無變化,，而油樣的甲醇提取液一加水立刻混濁,。

     這一小部分的油分對于檢測沒有什么太大影響，但對于色譜柱污染較大。因此在不影響回收率的前題下如何排除油分的影響是該實(shí)驗(yàn)的一個(gè)重點(diǎn),。

     試過用各種吸附劑,、層析填料，其效果都不如一張普通的濾紙,。因?yàn)闉V紙能吸收油分,。先把甲醇提取液放于冰箱冷凍層冰凍幾小時(shí)，再趁涼過濾,。這是筆者目前發(fā)現(xiàn)的的驅(qū)油方法,。

     BHA、BHT需配合使用才會(huì)有較好的抗氧化效果,，因此有BHA就會(huì)有BHT,，而TBHQ一般是單獨(dú)使用。這一點(diǎn)對我們非常有用,，無論在氣相色譜還是液相色譜,，BHA、BHT的分離都相當(dāng)好,，但是TBHQ與BHT的峰形可能會(huì)有一部分重疊,，很難*分開；因此我們可以將BHA,、BHT配為一個(gè)標(biāo)準(zhǔn),，TBHQ單獨(dú)作一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，分別進(jìn)樣,，分別定量,。

     當(dāng)使用氣相色譜時(shí)，如用填充柱,，填料為10％SE－30 或 10％QF－1,，如使用毛細(xì)管柱，可選用10m以上,，0.53mm的非極性柱,。

     當(dāng)使用液相色譜儀時(shí)，流動(dòng)相為92:8的甲醇水溶液,，紫外檢測器,，檢測波長280nm，當(dāng)降低甲醇含量時(shí),，出峰時(shí)間會(huì)延遲,，BHT尤其顯著。

     為什么要用三次萃取呢,。如果只針對BHA,、TBHQ，一次萃取就夠了，而BHT在甲醇中的溶解性稍弱,，因此用三次萃取增大回收率,。

     如果對人身防護(hù)很看重，可以用乙醇代替甲醇,，但它與油分的互溶程度更大些,，提取液似乎沒有那么“干凈”。當(dāng)處理某些輕質(zhì)油如代可可脂時(shí),，會(huì)有*混溶現(xiàn)象,，這時(shí)只能用甲醇。

     如果要檢測糕點(diǎn)類食品中的BHA,、BHT,、TBHQ，舊國標(biāo)中有用乙醚提取出油脂,，再對油脂進(jìn)行檢測的方法,。這樣做費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且提取回收率不高,?？梢灾苯佑眉状紝κ称愤M(jìn)行提取，提取液直接進(jìn)樣,。

     如果要得到比較準(zhǔn)確的結(jié)果,，應(yīng)在冰箱的冷凍層存有固體的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。因?yàn)锽HA,、BHT、TBHQ的標(biāo)準(zhǔn)溶液雖然在一般情況下較穩(wěn)定,，但有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)爆發(fā)式的衰減,就是高濃度的貯備液也難以幸免,，尤其是TBHQ。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的準(zhǔn)確是實(shí)驗(yàn)的根本所在,，因此我們要提防這一情況,，如果標(biāo)準(zhǔn)峰面積較前一段實(shí)驗(yàn)的峰面積明顯減小，則應(yīng)引起重視,。如有條件,，可用紫外光度計(jì)掃描標(biāo)準(zhǔn)溶液，每次記錄吸收值,。

     為實(shí)驗(yàn)方便計(jì),，BHA、BHT,、TBHQ的標(biāo)準(zhǔn)溶液可以按以下方法配制,。先各稱取0.025克固體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分別溶于25ml容量瓶中（溶劑：甲醇），得濃度為1.00g/L的貯備液，再各吸取1.0ml于50.0ml容量瓶中,，定容,，得濃度為0.02g/L的使用液。BHA,、BHT的使用液可以也配在一起,，TBHQ單列。這個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)峰與實(shí)際的樣品峰面積接近,，適于做單點(diǎn)定量法,。