Agilent液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序 

1.目的：建立一個(gè)液相色譜的標(biāo)準(zhǔn)操作程序,。

2.范圍：適用于Agilent液相的使用,。

3.責(zé)任：使用Agilent液相的化驗(yàn)員。

4.程序

4.1工作環(huán)境 
實(shí)驗(yàn)室溫度為20～27℃,，溫度變化<3℃/hr,，相對(duì)濕度<80%，液相色譜儀工作臺(tái),，長(zhǎng)2米,、寬0.8米、承重大于80公斤,，離墻距離0.3米以上,。單相交流220V，（+5%～10%）,，50～60Hz,，有單的良好接地。配置穩(wěn)壓電源,，功率大于2.5千瓦。

4.2使用前的準(zhǔn)備 
4.2.1二次蒸餾水,，（建議用0.45微米水相濾膜過濾）,；甲醇或乙晴（色譜純），（建議用0.45微米有機(jī)相濾膜過濾）,；其他樣品所需流動(dòng)相,，（都需經(jīng)過0.45微米濾膜過濾）。將上述溶劑放入超聲波池,，除去氣泡,，方可使用。 
4.2.2把流動(dòng)相放入溶劑瓶中,，打開purge閥,，單擊pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單,，單擊setup選項(xiàng),，進(jìn)入pump編輯畫面，設(shè)flow：5ml/min,，單擊OK,；單擊pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單,，單擊pump control選項(xiàng),，選中ON,，單擊OK，則系統(tǒng)開始purge,，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止,，切換通道繼續(xù)purge，直到所有要用通道無氣泡為止,；單擊pump圖標(biāo),，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊setup選項(xiàng),，進(jìn)入pump編輯畫面,，設(shè)flow：1.0ml/min，關(guān)閉purge valve,。單擊pump下的的瓶圖標(biāo),，輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積，也可輸入阻止分析和關(guān)泵的體積,，單擊OK,。

4.2.3進(jìn)行樣品前處理（稀釋或溶解至所需濃度）。

4.3Agilent液相色譜儀實(shí)驗(yàn)步驟

4.3.1準(zhǔn)備 
4.3.1.1開啟Agilent 1100LC各模塊電源,。

4.3.1.2打開計(jì)算機(jī),，雙擊online圖標(biāo)。 
4.3.1.3從"view"菜單中選擇"method and run control"畫面,，單擊"view"菜單中的"show top toolbar","show status toolbar","system diagram","sampling diagram"使其命令前有"√"標(biāo)志,。

4.3.2數(shù)據(jù)采集方法編輯

4.3.2.1從“method"菜單中選擇"edit entire method"項(xiàng)，選中除"data analysis"外的三項(xiàng),，單擊OK,，進(jìn)入下一畫面。 
4.3.2.2在"method comments"中加入方法的信息（如This is for test!）,，單擊OK進(jìn)入下一畫面,。

Agilent液相色譜儀

4.3.2.3泵參數(shù)設(shè)定 
在"flow"處輸入流量1ml/min，在"solvent"處輸入流動(dòng)相中各溶劑所占的比例,，也可"insert"一行"timetable",編輯梯度,。在"pressure limits max"處輸入柱子的zui大耐高壓，以保護(hù)柱子,，單擊OK進(jìn)入下一畫面,。

4.3.2.4柱溫箱參數(shù)設(shè)定 
在"temperature"下面的方框內(nèi)輸入所需的溫度，并選中它點(diǎn)擊"more>>"鍵,，如圖所示,，選中"same as left"使柱溫箱的溫度左右一致，點(diǎn)擊OK進(jìn)入下一畫面,。

4.3.2.5 VWD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定 
在"wavelength"下方的空白處輸入所需的檢測(cè)波長(zhǎng),，在"peak width(response time)"下方點(diǎn)擊下拉式三角框,，選擇合適的響應(yīng)時(shí)間，如>0.1min ,。 在"timetable"中可以"insert"一行,，可以輸入隨時(shí)間切換的波長(zhǎng)。

Agilent液相色譜儀

4.3.2.6在"run time checklist"中,，選中"data acquisition",，單擊OK。

4.3.2.7單擊“method"菜單,，選中"save method as",，輸入一方法名，單擊OK,。

4.3.2.8從"run control"菜單中選擇"sample info"選項(xiàng),，輸入操作者姓名，在"data file"中選擇"manual"或"prefix",。 
4.3.2.9從"instrument"菜單中,，選擇"system on"。 
4.3.2.10單擊OK,，等儀器ready,，基線平穩(wěn)，從"method"菜單中選擇"run method",，進(jìn)樣,。 
4.3.2.11進(jìn)樣時(shí)，閥門位置處于"inject"位置,，進(jìn)樣針取樣量應(yīng)為所規(guī)定體積的三倍，用濾紙拭凈針頭表面殘留液,，進(jìn)樣時(shí)要輕而快,，進(jìn)樣完畢應(yīng)快速將閥門搬至"load"位置，進(jìn)樣完畢,，數(shù)分鐘后將進(jìn)樣針拔下,，閥門回復(fù)到"inject"位置。 4.3.3數(shù)據(jù)分析方法編輯

4.3.3.1從"view"菜單中,，單擊"data analysis"進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面,。

4.3.3.2從"file"菜單中選擇"load signal"選項(xiàng)，選中您的數(shù)據(jù)文件,，單擊OK,。

4.3.3.3做譜圖優(yōu)化，從"graphics"菜單中選擇"signal options"選項(xiàng),，從"ranges"中選擇"auto scale"及合適的顯示時(shí)間,，單擊OK,，或選擇"use ranges"調(diào)整。反復(fù)進(jìn)行,，直到圖的比例合適為止,。

4.3.3.4積分 
4.3.3.4.1從"integration"中選擇"auto integrate"，如積分結(jié)果不理想,，再?gòu)牟藛沃羞x擇"integration events"選項(xiàng),，選擇合適的"slope sensitivity","peak width","area reject","height reject"。 
4.3.3.4.2從"integration"菜單中選擇"integrate"選項(xiàng),，則數(shù)據(jù)被積分,。

4.3.3.4.3如積分結(jié)果不理想，則重復(fù)上兩步動(dòng)作,，直到滿意為止,。

4.3.3.4.4單擊左邊"√"圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法,。

4.3.3.5打印報(bào)告 
4.3.3.5.1從"report"菜單中選擇"specify report"選項(xiàng),，進(jìn)入。 
4.3.3.5.2單擊"quantitative results"框中"calculate"右側(cè)的黑三角,，選擇所需的報(bào)告形式,，其他選項(xiàng)不變，單擊OK,。 
4.3.3.5.3從"report"菜單中選擇"print report",，則報(bào)告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機(jī)上,，則單擊"report"底部的"print"鈕,。

4.3.4Agilent液相色譜儀關(guān)機(jī) 
4.3.4.1關(guān)機(jī)前，先用水和有機(jī)溶劑對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行梯度沖洗,，然后再用有機(jī)溶劑沖洗系統(tǒng),，然后關(guān)泵（適用于反相色譜柱）。[正相色譜柱用適當(dāng)?shù)娜軇_洗]

4.3.4.2退出化學(xué)工作站,，及其他窗口,。 
4.3.4.3關(guān)掉Agilent1100電源開關(guān)，計(jì)算機(jī)（用shut down關(guān)）,。 
4.4.1色譜柱長(zhǎng)時(shí)間不用,，存放時(shí)，柱內(nèi)應(yīng)充滿溶劑,，兩端封死,。 
4.4.2對(duì)于手動(dòng)進(jìn)樣器，當(dāng)使用緩沖液時(shí)，要用水沖洗進(jìn)樣口,，同時(shí)搬動(dòng)進(jìn)樣閥數(shù)次,。

4.4.3流動(dòng)相使用前必須過濾、超聲,，不能使用多日存放的純化水（易長(zhǎng)菌）,，應(yīng)每天更換純化水。

Agilent液相色譜儀