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液相色譜儀3大系統(tǒng)
系統(tǒng)由儲液器,、泵、進樣器,、色譜柱,、檢測器、記錄儀等幾部分組成,。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對運動時,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來液相色譜儀主要有進樣系統(tǒng),、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng),、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),，下面將分別敘述其各自的組成與特點。
系統(tǒng)由儲液器,、泵、進樣器,、色譜柱,、檢測器、記錄儀等幾部分組成,。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對運動時,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來液相色譜儀主要有進樣系統(tǒng),、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng),、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),，下面將分別敘述其各自的組成與特點。
1．進樣系統(tǒng)
液相色譜儀一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作,，進樣量是恒定的,。這對提高分析樣品的重復性是有益的,。
2．輸液系統(tǒng)
該系統(tǒng)包括高壓泵,、流動相貯存器和梯度儀三部分,。高壓泵的一般壓強為l．47～4．4X10Pa,，流速可調且穩(wěn)定，當高壓流動相通過層析柱時,，可降低樣品在柱中的擴散效應，可加快其在柱中的移動速度,，這對提高分辨率,、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的,。流動相貯存器和梯度儀,，可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變，包括改變洗脫液的極性,、離子強度,、PH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等,。這就可使各種物質(即使僅有一個基團的差別或是同分異構體)都能獲得有效分離,。
3.分離系統(tǒng)
該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等,。色譜柱一般長度為10～50cm(需要兩根連用時,，可在二者之間加一連接管)，內徑為2～5mm,，由"**不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成,，住內裝有直徑為5～10μm粒度的固定相(由基質和固定液構成)．固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或硅膠構成，它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去),、多孔性(孔徑可達1000?)和比表面積大的特點,，加之其表面經過機械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣)，或者用化學法偶聯(lián)各種基因(如磷酸基,、季胺基,、羥甲基、苯基,、氨基或各種長度碳鏈的烷基等)或配體的有機化合物,。因此，這類固定相對結構不同的物質有良好的選擇性,。例如,，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素(PSA)后，就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來,。另外,，固定相基質粒小,，柱床極易達到均勻、致密狀態(tài),，極易降低渦流擴散效應,。基質粒度小,，微孔淺,，樣品在微孔區(qū)內傳質短。這些對縮小譜帶寬度,、提高分辨率是有益的,。根據(jù)柱效理論分析，基質粒度小,，塔板理論數(shù)N就越大,。這也進一步證明基質粒度小，會提高分辨率的道理,。再者,，液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調到60C，通過改善傳質速度,，縮短分析時間,，就可增加層析柱的效率。
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