森林腦炎（蜱傳腦炎）病毒ELISA檢測試劑盒

廣州健侖生物科技有限公司

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【產(chǎn)品名稱】：森林腦炎ELISA檢測試劑盒說明書

【預(yù)期用途】

本試劑盒可用于定量檢測人血清血漿和腦脊髓液中的抗腦炎病毒（TEBV）的IgG抗體，從而控制體液免疫狀態(tài)和確定疫苗接種后的血清轉(zhuǎn)化。鑒別明顯的和潛在的腦炎病毒的感染，通常附帶著抗腦炎病毒的IgM的檢測,。

【實(shí)驗(yàn)步驟】

1.       將200μL已稀釋的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣本加到相應(yīng)的微孔中,。

2.       用封板片封板,，室溫下（18-25℃）孵育1小時(shí)

3.       揭去封板片，棄去反應(yīng)液,，用稀釋后的洗滌液洗板3次（250μL/孔/次）,，后通過拍板拍去殘留的液體

4.       將200μL已稀釋的酶聯(lián)物加到每個孔中

5.       用封板片封板，在室溫下（18-25℃）孵育1小時(shí)

6.       重復(fù)步驟3

7.       將200μL  TMB底物液加到每個孔中

8.       室溫(18-25℃)孵育30分鐘

9.       按加TMB底物液的順序,，將50μL的終止液加到每個孔中,，輕輕混勻

10.   在加入終止液后10分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀在450nm±10nm處讀數(shù),。

【結(jié)果的計(jì)算】

1.       標(biāo)準(zhǔn)曲線方法

在半對數(shù)紙上（或者使用自動化儀器）以每個標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為Y軸,，相應(yīng)的濃度為X軸做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，推薦使用4參數(shù)邏輯函數(shù)（Y=d+(a-b)/(1+(x/c)b)）,。

樣本的濃度應(yīng)當(dāng)直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀取,，如果有稀釋，則在計(jì)算中應(yīng)該乘以稀釋倍數(shù),，如果樣本的濃度過高,，則需要按照實(shí)驗(yàn)前設(shè)置說明稀釋樣本。

2.       一點(diǎn)標(biāo)定法

（1）       樣本濃度的手冊檢測

需要使用用校準(zhǔn)品4,、質(zhì)控血清和樣本各自的平均OD值,。校準(zhǔn)品4的OD必須要在的范圍內(nèi)（見一點(diǎn)標(biāo)定法評估表）。每次檢測都必須計(jì)算檢測特殊的校正因子,。校準(zhǔn)品4的理論OD值都是按特定批次檢測得出的（見一點(diǎn)標(biāo)定法評估表）,。將質(zhì)控血清和樣本的OD乘以校正因子：

質(zhì)控血清和樣本濃度可以從批次參考曲線中讀出。

例子：

校準(zhǔn)品4的理論OD值                  OD=1.377

校準(zhǔn)品4的檢測OD值                  OD=1.273

校正因子F                             F=1.082

樣本的檢測OD值                      OD=0.937

樣本的校正OD值                      OD=1.014

讀取濃度                         0.5VIEU/mL

（2）       腦脊髓液樣本濃度的計(jì)算（一點(diǎn)標(biāo)定法軟件）

打開名為“One Point Calibration TBE IgG Liquor”的Excel文件,，將QC證書的下列指標(biāo)填到Excel中：

校準(zhǔn)品4的理論OD值

校準(zhǔn)品4的OD范圍

臨界1和臨界2的理論OD值

臨界1 OD=灰區(qū)的低點(diǎn)

臨界2 OD=灰區(qū)的高點(diǎn)

填入檢測到的校準(zhǔn)品4平均OD,，將腦脊髓液樣本的鑒別和OD插入到已準(zhǔn)備好的計(jì)算單中。腦脊髓液樣本的求值和OD都會自動完成,。

【結(jié)果的判定】

血清/血漿

＜63VIEU/mL         陰性

63-126VIEU/mL       灰區(qū)

＞126VIEU/mL        陽性

腦脊髓液

OD＜臨界1理論OD                      陰性

臨界1理論OD＜OD＜臨界2理論OD       灰區(qū)

OD＞臨界2理論OD                      陽性

【結(jié)果的說明】

1.       疫苗

通過檢測血清血漿中的抗TBE的IgG抗體來證明血清轉(zhuǎn)化

（1）       抗TBE IgG陰性

接種疫苗后無血清轉(zhuǎn)化

（2）       抗TBE IgG 灰區(qū)

可能有血清轉(zhuǎn)化,，建議在2~4周內(nèi)再次檢測

（3）       抗TBE IgG陽性

接種疫苗后有血清轉(zhuǎn)化

2.       感染

（1）       抗TBE IgM和抗TBE IgG 陰性    

無感染

（2）       抗TBE IgM陰性和TBE IgG 陽性  

這可能是潛在的免疫或者是幾周或幾月之前的感染

（3）       抗TBE IgM陽性和TBE IgG陰性

可能有新近感染

（4）       抗TBE IgM和抗TBE IgG都陽性

有感染